高速・高正確・高成功率PCR Master Mix

KOD One^® PCR Master Mix
KOD One^® PCR Master Mix -Blue-

TOYOBO

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価格表用途説明特長実施例関連製品

価格表

KOD One^® PCR Master Mix (Dye-free 2×PCR Master Mix)

Code No.	包装	価格(税別)	保存温度	説明書仕様書	SDS	法規制^※
KMM-101	1mL×5本	￥38,000	-20℃	ＭＤ	Ｓ	なし
KMM-101X5	(1mL×5本)×5	￥152,000	-20℃	ＭＤ	Ｓ	なし
KMM-101X10	(1mL×5本)×10	￥285,000	-20℃	ＭＤ	Ｓ	なし

KOD One^® PCR Master Mix -Blue- (Dye-containing 2×PCR Master Mix)

Code No.	包装	価格(税別)	保存温度	説明書仕様書	SDS	法規制^※
KMM-201	1mL×5本	￥38,000	-20℃	ＭＤ	Ｓ	なし
KMM-201X5	(1mL×5本)×5	￥152,000	-20℃	ＭＤ	Ｓ	なし
KMM-201X10	(1mL×5本)×10	￥285,000	-20℃	ＭＤ	Ｓ	なし

用途

●PCR

説明

本製品は、高い正確性・増幅効率をもつ改変型KOD DNA polymerase(UKOD)を用いたPCR用2×マスターミックスです。
改良型伸長アクセラレーターを含有するため、1kbまでは 1sec.、1～10kbは 5sec./kb、10kb以上は 10sec./kbでPCRを行うことが可能です。高い成功率を併せ持ち、未精製のクルードサンプルからの増幅や、イノシン(dI)やウラシル(dU)を含むプライマー・テンプレートを用いたPCRにもご利用になれます。
また、Polymerase活性と3'→5'Exonuclease活性を抑える2種類のモノクローナル抗体が混合されており、特異性の高いHot start PCR を行うことができます。

特長

●高速PCRが可能
1kbまでは 1sec.、1～10kbは 5sec./kb、10kb以上は 10sec./kbで伸長反応を行うことが可能であり、PCR実験を短時間で終えることが可能です。

●簡便
プライマー・テンプレート以外の成分があらかじめ混合されており、反応液調製が容易であり、また再現性の高い結果を得ることができます。またKOD One^® PCR Master Mix -Blue- [Code No. KMM-201] はLoading Dye(BPB)が混合されており、反応終了後、そのままゲルにアプライすることが可能です。

●優れた正確性
Taq DNA polymerase の約80倍と、KODシリーズ最高レベルの正確性を保持しています。

●クルードサンプルからも効率よく増幅 (実施例2)

●イノシン(dI)やウラシル(dU)を含むプライマー・テンプレートを用いたPCRに対応 (実施例5)

実施例

1.高速PCRによる200bp～10kbのターゲットの増幅

ヒトゲノムDNAをテンプレートとして伸長時間の短い高速PCRサイクルで増幅を実施しました。
その結果、本製品では1 kb以下のターゲットは伸長時間1 sec.で、1～10 kbのターゲットは、5 sec./ kbで明確なバンドを確認することができました。

2.クルードサンプルからの増幅

マウステールライセート(アルカリ溶解法)、血液を用いて、マウスThy-1遺伝子、ヒト β-globin遺伝子の増幅を行いました。反応はそれぞれのPCR酵素の推奨条件に従って5 sec./ kbの伸長時間で実施しました。その結果、KOD One^® PCR Master Mixのみ明確なバンドを確認することができました。

3.逆転写反応液の持ち込み可能量の確認

逆転写反応液(cDNA)に含まれるRNAはPCRに対して阻害的に働くため、大量のcDNAの添加は反応阻害につながります。そこで、cDNAの持ち込み可能量を確認するため、cDNAの添加量をふり、TFR遺伝子の検出を行いました。
その結果、KOD One^® PCR Master MixシリーズはRNAによる阻害を受けにくく、従来品や他社品では増幅困難な多量のcDNAを添加した条件においても良好な増幅を行うことができました。

実施例4:プラスミドDNA, cDNAをテンプレートとした検出感度の比較
 実施例5:イノシンを含むプライマーを用いた増幅
 実施例6:相補的なプライマーを用いる変異導入(Site-Directed Mutagenesis)
実施例7:GC含量70%以上の領域を含むターゲットの増幅
 実施例8:哺乳動物細胞用発現ベクターにクローニングされた遺伝子配列への3塩基変異導入
 実施例9:糸状菌・酵母のダイレクトPCR
実施例10:酵母の遺伝子破壊の確認
 実施例11高GC配列 mouse c-Maf cDNA全長配列の増幅
 実施例12:マウス肝臓におけるROSA26領域のPCR増幅
 実施例13:初代細胞からのcDNAクローニング
 実施例14:遺伝子の発現ベクター間の移し替え
 実施例15:Aspergillus fumigatus flbC 遺伝子欠損株の PCR ジェノタイピング
 実施例16:ニワトリ遺伝子のクローニング用サンプル調製
 実施例17:ワンステップ法で調製した植物ライセートからの増幅
 実施例18:フミン酸耐性の確認
 実施例19:高速PCRによる 17.5～40kbの長鎖ターゲットの増幅
 実施例20:次世代シーケンサー(NGS)のライブラリー増幅
 実施例21:次世代シーケンサー(NGS)を用いたSARS-CoV-2亜系統の分類

PCR試薬選択ガイド動画ギャラリー

製品内容

【KMM-101】
Master Mix
【KMM-201】
Master Mix(dye入り)

1mL×5本

1mL×5本

基本反応条件

(μL)

滅菌蒸留水
KOD One PCR Master Mix
Primer(10μM each)
Template DNA
Genomic DNA ～200ng
Plasmid DNA ～50ng
cDNA(RNA相当量)　～750ng
生体試料・粗抽出液～5μL

X
25
1.5
Y

Total Volume

<3ステップサイクル>
98℃, 10sec.
Tm-5℃, 5sec.
68℃, 1～10sec./kb

25〜45 cycles

伸長時間は、ターゲット鎖長に応じて以下のように設定してください。
1 kb以下:1 sec.
1～10 kb:5 sec./ kb
10 kb～:10 sec./ kb

<2ステップサイクル>
98℃, 10sec.
68℃, 5～10sec./kb

25〜45 cycles

伸長時間は、ターゲット鎖長に応じて以下のように設定してください。
1 kb以下:5 sec.
1～10 kb:5 sec./ kb
10 kb～:10 sec./ kb

ワンポイントアドバイス: ●保存について
凍結融解の繰り返しは、20回程度では品質に影響がないことが確認されています。
短期間(1か月以内)であれば、2～8℃で保存可能です。

●プライマーについて
可能な限り、22～35mer程度(Tm値>63℃)をご使用ください。
GC含量を45～60%として、5’側の半分は60～70%, 3’側の半分は40～50%のGC含量になるように設計することで特異性を高めることができます。

※プライマーのTm値の計算は、最近接塩基対法(Nearest Neighbor method)を用いております。プライマーのTm値計算表(EXCEL)は、こちらからダウンロードできます。イノシンを含むプライマーのTm値はこの方法では計算できません。

●DNA末端平滑化に用いる場合はこちらをご覧ください。

KOD One実施例集はこちらからダウンロードできます。 2.5MB

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KOD One^® PCR Master Mix (Dye-free 2×PCR Master Mix)

KOD One^® PCR Master Mix -Blue- (Dye-containing 2×PCR Master Mix)

用途

説明

特長