実施例
KOD One 実施例19 高速PCRによる 17.5～40kbの長鎖ターゲットの増幅
KOD One® PCR Master Mix および他社PCR酵素を用い、ヒトゲノムDNAをテンプレートとして長鎖ターゲットの増幅を行いました。
【プライマー配列】
| ターゲット 17.5kb HBB | |||
| Forward Primer | TGCACCTGCTCTGTGATTATGACTATCCCACAGTC | ||
| Reverse Primer | ACATGATTAGCAAAAGGGCCTAGCTTGGACTCAGA\ | ||
| ターゲット 24kb TPA | |||
| Forward Primer | CCTTCACTGTCTGCCTAACTCCTTCGTGTGTTCC | ||
| Reverse Primer | TGTCTCCAGCACACAGCATGTTGTCGGTGAC | ||
| ターゲット 32kb HBB | |||
| Forward Primer | AGACTTCACATGCTGCTCTGTGCATCCGAGTG | ||
| Reverse Primer | ACATGATTAGCAAAAGGGCCTAGCTTGGACTCAGA | ||
| ターゲット 40kb HBB | |||
| Forward Primer | GTTCTCCTCTGCATATCTCCCCACCGCATCTCTTT | ||
| Reverse Primer | CCTTCAGTGCCCATGATGTAGGAAAGTGTGGCATA | ||
【反応条件】
| (1) 反応液組成 | (μL) | (μL) | (2) サイクル条件 | ||||
| Lane 1-3 | Lane 4-8 | ||||||
| 滅菌蒸留水 | 7.8 | 3.8 | 98℃, 10sec. |  |
30cycles | ||
| KOD One® PCR Master Mix | 10 | 10 | 60℃, 5sec. | ||||
| 10pmol/μL Primer F | 0.6 | 0.6 | 68℃, 10sec./kb | ||||
| 10pmol/μL Primer R | 0.6 | 0.6 | |||||
| 10ng/μL ヒトゲノムDNA | 1 | 5 | 他社PCR酵素は、メーカー 推奨の 条件にて実施しています。 |
||||
 |
|||||||
| Total Volume | 20 | 20 | |||||
【結果】
KOD One® PCR Master Mix を用いた場合、17.5~40kbまで増幅が確認できました。
KOD One 製品ページ
実施例一覧ページ
