高効率TAクローニングキット
TArget Clone™/ TArget Clone™ -Plus-
TOYOBO
価格表
TArget Clone™
TArget Clone™ -Plus-
用途
●通常のTAクローニング 「TArget Clone™」
●KODシリーズ由来の平滑末端産物のTAクローニング 「TArget Clone™ -Plus-」
●KODシリーズ由来の平滑末端へのdA付加 「10×A-attachment Mix 」
説明
高効率なTAクローニングキットです。Taq系酵素で増幅されたPCR産物に加え、KODシリーズで増幅された平滑末端PCR産物もTAクローニングすることが可能です。
TaqやTth DNA polymerase、Blend Taq®、KOD Dashなどの増幅産物は3'末端にアデニンを付加されたものが多く、TArget Clone™[Code No. TAK-101]を用いて直接Tベクターに連結することができます。
一方、KOD系(KOD DNA Polymerase、KOD -Plus-、KOD FX、KOD Oneなど)のPCR産物の3'末端のほとんどは平滑化されているため、PCR産物をそのまま用いてTAクローニングすることはできません。そこで、TArget Clone™ -Plus-[Code No. TAK-201]は、10×A-attachment Mixを用いて平滑末端に塩基(主にアデニン)を付加する反応を加えることにより、TAクローニングを可能にしています。10×A-attachment Mixには、末端に塩基を付加するためのTaq DNA polymeraseと反応後に残留しているKODの3'→5'Exonuclease活性(校正活性)を中和するための抗KOD抗体が含まれています。
10×A-attachment Mix[Code No. TAK-301]の単品販売もございます。
特長
-
●迅速・高効率
ライゲーション反応は最短5分で完了します。
●確実
LacZを用いたカラーセレクションが可能です。
●便利
マルチクローニングサイトの両端に転写用のプロモーター(T7、T3)を有しており、転写産物の調製に用いることができます。
●平滑末端PCR産物にも対応 「TArget Clone™ -Plus-」[TAK-201]
KOD、KOD -Plus-、KOD FX、KOD OneなどのPCR産物を使用してTAクローニングを行うことができます。PCR産物を10×A-attachment Mix [Code No. TAK-301]と混合し、10分間反応させるだけでdA付加が完了。
実施例
さまざまなPCR産物を用いたTAクローニング効率の検討
高正確性酵素:KOD -Plus-、KOD -Plus- Ver.2、及びBlend Taq®を用いて、human genomeよりβ-globin遺伝子0.5kbをPCR増幅しました。その後、PCRプロダクトを精製なしでTArget Clone™、及びTArget Clone™ -Plus-を用いて、TA2 VectorにTAクローニングを行いました。その結果、KOD -Plus-及びKOD -Plus- Ver.2を用いた場合、TArget Clone™ -Plus-を用いることにより、格段にクローニング効率が向上することが分かりました。一方Blend Taq®ではTArget Clone™ -Plus-と比べると、若干効率は低下しますが、TArget Clone™を用いても問題なく高効率にTAクローニングできることが分かりました。
参考文献
1) H. Mizuguchi et al., J. Biochem. (Tokyo), 126: 762-768 (1999)
製品使用文献
1) F. Ge et al., Journal of Biochemistry, 143(5): 603-609. (2008)
- 製品内容
【TAK-101】
pTA2 Vector(50ng/μL)
2×Ligation Buffer
T4 DNA Ligase
【TAK-201】
pTA2 Vector(50ng/μL)
2×Ligation Buffer
T4 DNA Ligase
10×A-attachment Mix [TAK-301]
【TAK-301】
10×A-attachment Mix
10μL
50μL
10μL
10μL
50μL
10μL
10μL
25μL (25回用)
- 基本反応条件
[TArget Clone™]
Distilled Water
2×Ligation Buffer
pTA2 Vector (50ng/μL)
PCR Product
T4 DNA Ligase
Total Volume
room temp.(15～25℃), 30min.
(3-X)μL
5μL
1μL
XμL
1μL
10μL
[TArget Clone™ -Plus-]
PCR Product from KOD
10×A-attachment Mix
Total Volume
60℃, 10min.
↓
Distilled Water
2×Ligation Buffer
pTA2 Vector (50ng/μl)
dA-attached PCR products
T4 DNA Ligase
Total Volume
room temp.(15～25℃), 30min.
9μL
1μL
10μL
(3-X)μL
5μL
1μL
XμL
1μL
10μL
[10×A-attachment Mix]
PCR Product from KOD
10×A-attachment Mix
Total Volume
60℃, 10min.
↓
dA-attached PCR product
T-vector
Ligation Reagent
room temp.(15～25℃), 30min.
9μL
1μL
10μL
- ワンポイントアドバイス
以下のケースではdA付加反応前にPCR産物の精製が必要です。
・KODシリーズで増幅したPCR産物にエキストラバンドが生じている場合。
・KODシリーズ以外のプルーフリーディング活性を持つ酵素で増幅されたPCR産物を用いる場合。
精製PCR産物にdA付加を行う場合は、A-attachment Mixに加え、dNTP、MgCl2 、PCR Bufferを1×濃度になるように加えて反応します。
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English Page
- ※ 法規制について
- 毒： 毒物及び劇物取締法[医薬用外毒物]
- 国： 国民保護法[毒素]
- 劇： 毒物及び劇物取締法[医薬用外劇物]
- 組： カルタヘナ法(遺伝子組換え生物等の使用等の規制による
- 危： 消防法[危険物]
- 生物の多様性の確保に関する法律）
- Ｐ： PRTR法（化学物質排出把握管理促進法）[届け出義務物質]
- 申： ご購入時に申込書の提出が必要な製品
- 労： 労働安全衛生法[通知または表示義務物質]
- なし： 上記法令や申込書の提出に該当しない製品
