製品別FAQ

【TArget Clone】

Q TArget Clone^TM [Code No.TAK-101]とTArget Clone^TM -Plus- [Code No.TAK-201]はどのように使い分けるのでしょうか。

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A 

(TArget Clone^TM)
一般的なTaq系のPCR酵素(rTaqやBlend Taq^®など)やKOD Dash^®で増幅して末端にAが付加されたPCR産物のTAクローニングに使用します。

(TArget Clone^TM -Plus-)
高正確性PCR酵素 KOD DNA Polymerase, KOD -Plus- シリーズ および KOD FX シリーズで増幅して末端にAが付加されていないPCR産物のクローニングに使用します。

Q PCR産物の精製は必要でしょうか。

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A 

以下の場合には、精製が必要となります。
・PCR産物に夾雑物を多く含む場合
・PCR産物にプライマーダイマーを多く含む場合
・PCR産物に非特異反応に起因するバンドを含む場合
・KOD系以外のPCR酵素で増幅した産物にdAを付加する場合
また、精製されたPCR産物を用いて、dA付加反応を行う場合は、PCR増幅に用いたバッファー、dNTP、(マグネシウム)をPCR時の濃度となるように添加して9μLとし、10×A-attachment Mixを1μL添加します。

Q 付属の pTA2 Vector を使用する際に室温で放置可能でしょうか?

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A 

pTA2 VectorのdT突出末端は不安定なので、室温で長時間放置することは避けてください。
また、凍結融解の繰り返しもできるだけ避けるようにしてください(凍結融解10回までは、ほとんど性能劣化が認められません)。

Q ライゲーションを30分より短くすることは可能でしょうか。

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A 

短いDNA断片(2kb以下が目安)をライゲーションする場合には、5分間の反応で十分なクローニング効率が得られます。

Q ライゲーションを30分より長くすることで効率上げることは可能でしょうか。

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A 

室温での反応の時間を2時間まで伸ばすことによって、クローニング効率が向上することがあります。
一晩(12～18時間程度)反応させる場合には、4℃で反応させてください。

Q Taq DNAポリメラ-ゼ、Tth DNAポリメラ-ゼを用いた増幅産物をTAクローニングの前に保存することは可能でしょうか?

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A 

3’-dA-overhangsは不安定ですので、PCR後すぐに使用するか冷凍(-20℃)保存するようにし、室温で放置することは避けてください。また、凍結融解の繰り返しもできるだけ避けてください。

Q クローニングがうまくいかない場合の原因と対策方法を教えてください。

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A 

トラブルシューティングをご覧いただき、解決しない場合はお問い合わせください。
TArget Clone/ TArget Clone -Plus- トラブルシューティング

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