KOD -Plus- / KOD -Plus- Ver.2

KOD DNA polymeraseをベースに開発された高正確性PCR酵素です。弊社PCR酵素中、最高の正確性を示します。本酵素は、バッファー組成の改良やホットスタート法の採用により、従来品に比べ、正確性、及びPCR性能が格段に向上しています。KOD -Plus- Ver.2は、KOD -Plus-のバッファーをさらに改良し、PCR成功率が向上しています。

●優れた正確性(弊社No.1)
KOD DNA polymeraseの特長である最高水準の正確性をさらに向上させており、Taq DNA polymeraseの約80倍の正確性を示します。DNAクローニングに最適です。



●ホットスタートでPCRパフォーマンス向上
2種類の抗KOD抗体を酵素に混合することによって、非特異反応の原因となる常温下でのPolymerase活性と3'→5'Exonuclease活性を抑制しています。抗体はPCRの最初の変性ステップで失活し、増幅反応には影響を及ぼしません。

●伸長性・増幅効率向上
反応バッファー組成を至適化することにより、従来のKOD DNA Polymeraseよりも伸長性・増幅効率が向上しています。

●優れた耐熱性
Taq DNA polymeraseよりも耐熱性が優れているため、変性ステップの温度を高く設定することができ、GCリッチな高次構造を形成するようなターゲットに有効です。

●高いPCR成功率「KOD -Plus-Ver.2」[Code No. KOD-211]
増幅しにくいターゲットや長いターゲットに対するPCR成功率がKOD -Plus-より向上しています。また、逆転写反応液の持込みによる阻害も低減されています。
 

1. GCリッチターゲットの増幅比較

GC含量約70%のPseudomonasのリパーゼ遺伝子を含むプラスミドを鋳型に約2kbをターゲットとしてPCRを行い、rTaq DNA Polymeraseと増幅度の比較を実施しました。サイクルは、伸長温度以外は同一の条件で行いました。その結果、KOD-Plus-では通常の条件で強い増幅を確認することができたのに対し、rTaq DNA Polymeraseでは5%DMSOもしくはA社PCRエンハンサーを添加した条件でのみ増幅を確認することができました。

2. 他社高正確性PCR酵素とのPCR増幅性能の比較

Human β-globin遺伝子0.6～3.6kbをターゲットとして、KOD -Plus-、及び他社高正確性PCR酵素を用いて増幅し、比較を行いました。その結果、KOD -Plus-は他社High Fidelity酵素に比べ良好な増幅を示しました。

 

3. 各種cDNAをターゲットとした他社PCR用酵素との増幅性能の比較

HeLa total RNAより逆転写したcDNAを鋳型として、4種類のターゲットについてPCR効率の比較を行いました。
その結果、KOD -Plus- Ver.2は、他の酵素に比べて良好な増幅を示しました。特に増幅の難しい6.8kbのターゲットにおいても明瞭な増幅がみられました。


 

実施例4 : inverse PCRによる部位特異的変異導入
実施例5 : さまざまな鋳型を用いたLong PCR
実施例6 : Colony direct-PCRによる黄色ブドウ球菌の遺伝子プロフィール解析
実施例7 : Colony direct-PCRによる各種微生物遺伝子の簡便・迅速検出
実施例8 : ヘパリン含有サンプルを用いたPCRにおけるBetaine添加効果

1) J. Mo et al., J. Mol. Biol., 222: 925-936(1991)
2) M. Takagi et al., Appl. Environ. Microbiol., 63: 4504-4510(1997)
3) H. Hashimoto et al., J. Biochem.(Tokyo),125: 983-986(1999)
4) H. Mizuguchi et al., J. Biochem.(Tokyo),126: 762-768(1999)
5) H. Hashimoto et al., J. Mol. Biol.,306: 469-477(2001)
6) M. Watanabe et al., J. Biochem.(Tokyo),131: 183-191(2002)
7) H. Terasaki et al., Intl. J. Mol. Med., 9: 107-112(2002)