KOD Dash^®

本製品は、Barnesらの方法を用いて開発された高効率PCR用酵素です。
強い3'→5'Exonuclease活性(校正活性)を示すKOD DNA Polymerase と、遺伝子操作によって3'→5' Exonuclease活性を欠失させた改変型KOD DNA Polymeraseを最適な割合で混合することにより、優れたPCRパフォーマンスを実現しました。
単一酵素系(KOD DNA polymeraseとExo(-) KOD DNA polymerase)で構成されているため、至適条件、保存安定性、熱安定性が同一であり、安定した性能を発揮することができます。

●伸長時間30sec./1kb
伸長時間をTaq DNA polymeraseの半分の時間に設定することができるため、迅速PCRに向きます。

●優れたPCRパフォーマンス
微量の鋳型からも効率よくPCRが行うことができるため、一般的なPCRの他、コロニーダイレクトPCRやウイルス/細菌の検出などに適しています。

●優れた耐熱性
Taq DNA polymeraseよりも耐熱性が優れており、熱変性ステップの温度を高く設定することができるため、GC-richな高次構造をとるようなターゲットに有効です。

●TAクローニング対応
本酵素のPCR産物はTAクローニング可能です。正確性はTaq DNA polymeraseの約3倍程度です。

コロニーダイレクトPCRによるインサートチェック

弊社TAクローニングキット:TArget Clone^TM [Code No. TAK-101]を用いて、pTA2 Vectorに4.5kbのPCRプロダクトをクローニングした後、コロニー
ダイレクトPCRを行って、インサートの有無を確認しました。(宿主大腸菌:JM109)

3コロニーにインサートが挿入されていたことが確認できます。プライマーダイマーの生成はほとんど見られませんでした。

またデータは示しておりませんが、精製後のシーケンス結果も良好でした。

実施例2:マルチPCRによるSTECの病原性関連遺伝子の検出

1) M. Morikawa et al., Appli. Environ. Microbiol., 60: 4559-4566(1994)
2) M. Takagi et al., Appl. Environ. Microbiol., 63: 4504-4510(1997)
3) M. Nishioka et al., J. Biotechnology, 88: 141-149(2001)
4) W. M. Barnes, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 91: 2216-2220(1994)
5) H. Kanzaki, J. Bone and Mineral Res., 17: 210-220(2002)
6) H. Nakayashiki et al., Genetics, 153: 693-703(1999)
7) A. Kikuchi et al., Gene, 236: 293-301(1999)

製品使用文献:
1) H. Sawai et al., Chem. Commun., 2604-2605.(2001)
2) Y. Ogawara et al., J. Biol. Chem., 277(24): 21843-21850(2002)
3) T. Ohbayashi et al., Org. Biomol. Chem., 3: 2463-2468. (2005)