実施例
KOD One 実施例7 GC含量70%以上の領域を含むターゲットの増幅
GC含量が多い領域を含む、TGFB, ACE, CASP3, ATCB, BRAF をターゲットとして増幅を行いました。
【サンプル】 ヒトゲノムDNA
【プライマー配列】
| TGFB Forward Primer Reverse Primer ACE Forward Primer Reverse Primer CASP3 Forward Primer Reverse Primer |
: TCCACCTTGGTCAGTCTCCTATAAC : GCTGTGTGTACTCTGCTTGAACTTG : CCTCAGGCTCTTCTCCTCTCTACTC : GGTCATATTCCTCCACAAACTTGC : CTGGCTTTGTCTCCCTTCTAGGTAC : TGACCTTCTCCACACTCTAGAAACC |
ATCB Forward Primer Reverse Primer BRAF Forward Primer Reverse Primer |
: AACACCACACTCTACCTCTCAAGC : TTTAATTACAGGTGGCTCATACGTG : CCTTTACCTGAGAGTAAGCATCAGC : AACAAAACTGGAACGATACTCCTTG |
【反応条件】
| (1) 反応液組成 | (μL) | (2) サイクル条件 | ||||
| 滅菌蒸留水 | 21 | 98℃, 10sec. |  |
30cycles | ||
| KOD One® PCR Master Mix | 25 | 60℃, 5sec. | ||||
| 10pmol/μL Primer F | 1.5 | 68℃, 50sec. | ||||
| 10pmol/μL Primer R | 1.5 | (5sec./kb) | ||||
| 10ng/μL ヒトゲノムDNA | 1 | |||||
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A社Long PCR酵素は、メーカー 推奨の条件にて実施しています。 |
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| Total Volume | 50 | |||||
【結果】
KOD One® PCR Master Mixでは、いずれのターゲットにおいても増幅が見られましたが、A社 Long PCR 酵素では増幅は確認できませんでした。
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