実施例

KOD One 実施例12 マウス肝臓におけるROSA26 領域のPCR増幅

データご提供 : 大阪大学大学院 薬学研究科 分子生物学分野 飯塚 俊輔 様

<実験の目的>
マウス肝臓においてROSA26 領域を増幅可能か検討する。

<実験方法>

【サンプルの種類】
マウス肝臓から抽出したゲノムDNA

【サンプルの調製方法】
DNeasy Blood & Tissue Kit (Qiagen社)を用いてマウス肝臓のゲノムDNAを精製した。

【ターゲット遺伝子名と長さ】
ROSA26  /   300 bp

【プライマー配列】
Forward Primer  :  GCACTTGCTCTCCCAAAGTC             
Reverse Primer  :  ACACCTGTTCAATTCCCCTG

【反応液組成】                                                           【PCRサイクル】

		(μL)
	滅菌蒸留水	10.5		94℃  1min.
	KOD One® PCR Master Mix	12.5		98℃  10sec.		45cycles
	10μM Primer F	0.75		68℃  30sec.
	10μM Primer R	0.75
	ゲノムDNA (20ng/μL)	0.5
	Total Volume	25

【サイクラー機種】
Veriti 96-well Thermal Cycler (Applied Biosystems^®)

<結果・考察>
2%TBEゲルでサンプルを泳動しました。左から1レーン目にはInvitrogen社の100 bp ladderを、2~7レーン目にはマウス肝臓ゲノムDNAをテンプレートとして、KOD One を用いてPCRを行ったフラグメントを泳動しております。
すべてのサンプルで目的としていた300 bpに、単一のきれいなバンドが見られました。また、直接的な比較はしておりませんが、A社高速・高正確 PCR Master Mixを用いた場合にも、同じプロトコルで同様に300 bp付近に単一のバンドが見られることを確認しています。

<感想・ご意見等>
KOD Oneを使用して、A社高速・高正確 PCR Master Mixと同じプロトコルで目的のフラグメントを得ることができました。
今回の実験プロトコルでは、試薬の使いやすさ、PCRの質ともにA社高速・高正確 PCR Master Mixと同等であったと感じています。

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