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実施例 KOD FX 実施例4 Long PCRにおけるPrimerの精製グレード及び鎖長の影響 【実験方法】 下記の反応液組成にて、ヒトゲノムβ-globin領域の17.5kbをターゲットとして検討を行いました。また、PCRサイクルは、KOD FXの標準推奨条件である2ステップと、long PCR用に推奨しているステップダウンの2通りにて行いました。本検討にて使用したPrimerの配 ...
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実施例 KOD FX 実施例11 マウステール溶解液を直接用いたトランスジェニックマウスのジェノタイピング 【目的】 マウステール溶解液を直接用いて、トランスジェニックマウスのジェノタイピングを行い、ホモ/ヘテロの判定を行いました。挿入された遺伝子の周辺の配列は以下のようになります。 【方法】 1.マウステール Lysateの調製(アルカリ溶解法を使用) マウステールは右図のように簡便法(アルカリ ...
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実施例 KOD FX 実施例8 GCリッチ ターゲットの増幅 KOD FXでは、他社GCリッチ対応PCR試薬が増幅できないターゲットでも増幅できる場合があります。 I. ヒト TGF-β2.3kb(GC含量約70%) ヒト TGF-β2.3kb(GC含量約70%)をターゲットとして、KOD FX、KOD-Plus-および他社試薬を用いて下方の条件で増幅し、比較しました。他社酵素 ...
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実施例 KOD FX 実施例12 トランスジェニックマウステールからのジェノタイピング 【サンプル】 トランスジェニックマウステールライセート <ご注意> 1. 熱アルカリ溶液の取扱には十分ご注意ください。 2. Proteinase Kを用いて調製されたライセートを直接 PCRに用いることはお勧めできません。 Proteinase KとSDSがPCR反応に悪影響を及ぼす恐れが ありま ...
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実施例 KOD FX 実施例13 ヒト毛根サンプルからの簡便なPCR増幅 【サンプル調製】 毛根は、ヒト毛髪の根元から約2mm程度のところで切断し、毛根を含む部分をサンプルとしました。これを5本使用し、図1に示すアルカリ溶解法にてライセートを調製しました。なお、本方法では、毛根は完全に溶解しませんのでご注意ください(完全に溶解させる必要はありません)。また、溶解液の核酸濃度は測定できませんでした。 ...
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実施例 KOD FX 実施例14 マウスゲノムDNAを用いたPGK neo遺伝子の検出 【遺伝子名】PGK neo 【サンプル】Mouse genomic DNA 5～10ng 【ターゲット長】1.5kb 【プライマー条件】30mer, 0.4μM (final) 【サイクル】 KOD FX: 94℃ 2min , (98℃ 10sec., 68℃ 90sec.)×30 A社 ...
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実施例 KOD FX 実施例20 ヒトCYP11A1遺伝子のプロモーター領域の増幅 【遺伝子名】ヒトCYP11A1遺伝子5'上流領域 【サンプル】ヒト間葉系幹細胞株UE7T-13ゲノム 1ng 【ターゲット長】2350bp 【プライマー条件】27mer、0.25μm 【サイクル】 KOD FX: 94℃ 2min. (98℃ 10sec., 68℃ 2min.30sec.) &tim ...
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実施例 KOD FX 実施例21 ヒトSF-1cDNA(GCリッチ)の増幅 【遺伝子名】ヒトSF-1 【サンプル】ヒト精巣cDNA 1ng 【ターゲット長】約1.4kbp 【プライマー条件】23mer、0.25μm 【サイクル】 KOD FX: 94℃ 2min. (98℃ 10sec., 68℃ 1min.30sec.) × 30cycle 他社酵素:推奨条件 ...
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実施例 KOD FX 実施例22 コロニーPCRによる酵母形質転換体の確認 ≪Zymolyase処理あり≫ 【遺伝子名】 Xanthophyllomyces dendrorousからクローニングし、Saccharomyces cerevisiae Y187にプラスミドの状態で導入した配列4種(A-D) 【サンプル】 上記配列を導入したS. cerevisiae Y187のコロニーをつまようじで少量 ...
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実施例 KOD FX 実施例23 新規イネOsSRS3遺伝子の5´領域の単離 【遺伝子名】イネOsSRS3(5’ 領域のGC含量は、約80%) 【サンプル】イネ花芽由来のcDNA 【ターゲット長】2.4kb 【プライマー条件】 Forward 20mer 5’-TCCCGGCCTGACCTCTCTAC-3’ Reverse 20mer 5’-CAAA ...
