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実施例 KOD FX 実施例1 アルカリ溶解法で調製したマウステールライセートからの増幅 アルカリ溶解法(右の基本反応条件ご参照)で調製したマウステールライセート0.5μLを直接PCR反応液に添加して、Mouse membrane glycoprotein(Thy-1)gene(M10246)をターゲットとして、2ステップサイクルを用いて、30サイクルの増幅を行いました。 その結果、KOD ...
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実施例 KOD FX 実施例5 Template別増幅可能長 KOD FXでは、λDNAを鋳型に40kb、ヒトゲノムDNAを鋳型に24kb、cDNAを鋳型に13.5kbの増幅が可能です。 KOD FX 製品ページ 実施例一覧ページ
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実施例 KOD FX 実施例6 真核細胞最長DMD遺伝子(13.5Kb)のPCRクローニング ヒトジストロフィン(DMD)遺伝子は、真核細胞における最も長いmRNAの一つです。ここでは、KOD FXを用いて本遺伝子の全長クローニングを行った例をご紹介します。 【実験方法】 逆転写反応 1st Strand 合成キット:ReverTra Ace -α-® [ Code No. FSK-1 ...
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実施例 KOD FX 実施例7 プライマー設計に制限がある場合の増幅 配列情報が少なく、オープンリーディングフレーム(ORF)の末端にしかプライマーを設計できないような時など必ずしも最良なプライマーペアを設計できるとは限りません。以下に、通常のプライマーの設計が困難なターゲットの例として、MAPK1遺伝子(下記参照)のORFの増幅を行った結果を示します。 なお、他社製品のPCR条件は各社で推奨され ...
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実施例 KOD FX 実施例9 血液(Whole Blood)サンプルからの増幅 KOD FXは、血液(Whole Blood)サンプルからの直接増幅が可能です。 1. 他社製品との比較(写真上) 【サンプル】血液 1～4μL / 50 μL Reaction 【遺伝子名】Human β-globin gene 【ターゲット長】1.3kb 2. 伸長性の確認(写真下) 【サン ...
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実施例 KOD FX 実施例10 培養細胞懸濁液からの増幅 KOD FXと他社製品を用いて、細胞懸濁液からの直接増幅を試みました。 【サンプル】DMEM/10%血清培地を用いて培養したJurkat細胞 【ターゲット長】1.3, 3.6, 8.5 kb 【プライマー配列】 Primer 1.3 kb β-globin Target Primer F : 5’-TTAGGCCTT ...
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実施例 KOD FX 実施例4 Long PCRにおけるPrimerの精製グレード及び鎖長の影響 【実験方法】 下記の反応液組成にて、ヒトゲノムβ-globin領域の17.5kbをターゲットとして検討を行いました。また、PCRサイクルは、KOD FXの標準推奨条件である2ステップと、long PCR用に推奨しているステップダウンの2通りにて行いました。本検討にて使用したPrimerの配 ...
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実施例 KOD FX 実施例11 マウステール溶解液を直接用いたトランスジェニックマウスのジェノタイピング 【目的】 マウステール溶解液を直接用いて、トランスジェニックマウスのジェノタイピングを行い、ホモ/ヘテロの判定を行いました。挿入された遺伝子の周辺の配列は以下のようになります。 【方法】 1.マウステール Lysateの調製(アルカリ溶解法を使用) マウステールは右図のように簡便法(アルカリ ...
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実施例 KOD FX 実施例8 GCリッチ ターゲットの増幅 KOD FXでは、他社GCリッチ対応PCR試薬が増幅できないターゲットでも増幅できる場合があります。 I. ヒト TGF-β2.3kb(GC含量約70%) ヒト TGF-β2.3kb(GC含量約70%)をターゲットとして、KOD FX、KOD-Plus-および他社試薬を用いて下方の条件で増幅し、比較しました。他社酵素 ...
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実施例 KOD FX 実施例12 トランスジェニックマウステールからのジェノタイピング 【サンプル】 トランスジェニックマウステールライセート <ご注意> 1. 熱アルカリ溶液の取扱には十分ご注意ください。 2. Proteinase Kを用いて調製されたライセートを直接 PCRに用いることはお勧めできません。 Proteinase KとSDSがPCR反応に悪影響を及ぼす恐れが ありま ...
