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実施例 KOD FX 実施例34 淡水産シオグサ属藻類(緑藻)のDNA断片増幅 【背景】 現在、当研究室では汽水湖におけるシオグサ属藻類(緑藻)の多様性の研究を行っている。その一環として、天然藻体を用いたダイレクトシークエンスを行っているが、その際にはPCRによるDNAの増幅が不可欠である。サンプルとして用いているシオグサ属藻類は多糖類を多く含むことが知られており、これらはPCRにおいてDNAポリ ...
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実施例 KOD FX 実施例35 麹菌Aspergillus oryzaeの遺伝子破壊の確認 ※本実施例は、第61回 日本生物工学会大会(2009)にて発表されたものです。 【背景】 麹菌の遺伝子破壊を行った際の確認は、従来、DNAの抽出を伴った煩雑なものであった。今回、KOD FXを用い、麹菌の分生胞子を溶液中で加熱しただけのサンプルを用いて増幅を行い遺伝子型の判定を行った。 【サンプル】 麹菌 ...
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実施例 KOD FX 実施例36 コロニーPCRによる各種細菌DNAの検出 【サンプル】 ●実験A 嫌気性の腸内細菌(Bacteroides fragilis ATCC25285, Bifidobacterium adolescentis GAI1275, Peptostreptococcus magnus GAI5528, Lactobacillus acidophilus GAI1132)のコ ...
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実施例 KOD FX 実施例37 ヒト爪からの直接PCR 【サンプル】ヒトの爪(米粒の1/3程度の大きさ) 【遺伝子名・ターゲット長】 Human β-globin 1.3～8.5 kb 【プライマー】 1.3 kb β-globin Forward primer: 5’-TTAGGCCTTAGCGGGCTTAGAC-3’ Reverse primer: ...
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実施例 KOD FX 実施例38 タバコ葉からの直接PCR 【サンプル】 タバコの葉(2mm角) 【遺伝子名・ターゲット】 rbcL, rbcmtT 1.3～4.6 kb 【プライマー】 1.3 kb rbcL Forward primer: 5’-ATGTCACCACAAACAGAGACTAAAGC-3’ Reverse primer: 5’-AAGCAGCA ...
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実施例 KOD FX 実施例39 植物葉からの迅速DNA増幅 【背景】 実施例集に記載されていた95℃10分間の加熱による方法では,目的とするDNAの増幅が見られなかった。そこで、葉をペッスルを用いて破砕する方法を用い、少量多サンプルからのDNA簡易抽出と高効率PCRを実験の目的とした。 【サンプル】 イネおよびタケ類の葉 【サンプルの処理】 抽出液は実施例集に記載されていた Buffer A と ...
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実施例 KOD FX 実施例40 メダカ幼魚の遺伝子による性別判断方法 【サンプル】ヒメダカ (Oryzias latipes) の成魚のオス、メスおよび幼魚(性別不明) 【サンプルの処理】 (1) ヒメダカを氷の入ったシャーレに入れて1-2分間放置する。 (2) ヒメダカ尾鰭約50mgをはさみとピンセットを用いて切り取り、生体試料破壊器具(BioMasher; 株式会社ニッピ)の中に入れる。 ( ...
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実施例 Quick Taq 実施例4 増幅産物を用いた直接制限酵素処理 Quick TaqⓇ HS DyeMixによって増幅したPCR産物(β-globin遺伝子3.6kb)を用いて、数種類の制限酵素で処理を行い、増幅産物を直接制限酵素で切断できるか確認しました。 【方法】 1.Human Genomic DNA 50ngを鋳型としてPCRを行いました。 2.増幅産物を10μL使用 ...
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実施例 Can Get Signal immunostain 実施例8 皮膚モデルにおけるPCNA(増殖細胞核抗原)の検出(免疫染色) ヒト皮膚組織モデルTESTSKINTMから調製したパラフィン包埋切片を用い、1次抗体として抗PCNAマウスモノクローナル抗体、2次抗体にビオチン標識抗マウスIgG抗体をそれぞれ用いて、免疫組織化学染色PCNAの検出を行いました(ABC法)。抗体の反応には、Can ...
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実施例 KOD FX 実施例2 ワンステップ法で調製した植物ライセートからの増幅 ワンステップ法で調製したトマト、タバコ、イネの葉、及び精米のライセート1μlを直接PCR反応液に添加して、rbcLをターゲットとして、2ステップサイクルを用いて、30サイクルの増幅を行いました。その結果、KOD FXを用いたときのみ明瞭な増幅が認められました。 また、タバコ葉で2.2, 4.6kbをターゲットに ...
