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実施例 miRNAssay 実施例4 エクソソームライセートからのmiRNA検出 SuperPrep® miRNAssay® Cell Lysis & RT Kit for qPCRを⽤い、HeLa細胞の培養上清から回収したエクソソーム(上清2mL回収分)をライセート化し、9種のmiRNA(let-7a, c, d, e, f, g, i, miR-21,103)特異的なステムループRTプ ...
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実施例 RNA-direct 実施例5 TaqMan® プローブアッセイにおけるマルチプレックス性能比較 RNA-direct ® Realtime PCR Master Mix -ROX Free-[Code No. QRT-101RF]を用い、RSウイルス、インフルエンザウイルス、SARS-CoV-2を検出するマルチプレックスPCRを行いました。検出にはTaqMan® Probeを用い、各RN ...
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実施例 KOD One 実施例21 次世代シーケンサー(NGS)を用いたSARS-CoV-2亜系統の分類 データご提供 塩野義製薬株式会社 ワクチン開発研究所 | ワクチン基盤研究1グループ 黒岩 美帆 様 <実験の目的> NGSを用いた、下水に含まれるSARS-CoV-2亜系統を正確な組成比で検出するための技術開発。その精度確認のため、最大7種類のSARS-CoV-2亜系統由来RN ...
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実施例 Shin-RamDA-seq 実施例4 FFPEからのNGS解析 1ngのFFPE由来のRNAから、GenNext® Shin-RamDA-seq® Single Cell Stranded Kit [Code No. RML-101]を用いて、ライブラリー調製を行い、RNA-Seqを行いました。RNA-Seqにはイルミナ社MiSeq®を使用しました。使用したFFPE、RNA-Seqの解析 ...
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実施例 THUNDERBIRD Next Probe 実施例3 調製後の反応液の安定性 3種類の蛍光色素で標識したTaqMan® probe を用いたマルチプレックス検出系にて、赤痢、VTEC 、サルモネラ菌のgDNAの検出を行いました。 PCR反応液にプライマー、プローブ、テンプレートを混合した直後または遮光室温で48時間インキュベートした後に、取扱説明書のサイクル条件に従ってのターゲットの増幅 ...
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実施例 THUNDERBIRD Next Probe 実施例4 阻害物質存在下でのマルチプレックスPCR① 4種類の蛍光色素で標識したTaqMan® probe を用いたマルチプレックス検出系にて、β-actin 、GAPDH 、PLA、TUB遺伝子の検出を記載の阻害物質存在下で確認しました。 実験にはHeLa細胞total RNA由来のcDNAを4倍希釈[5段階]をサンプルとして用い、 ...
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実施例 THUNDERBIRD Next Probe 実施例5 阻害物質存在下でのマルチプレックスPCR② 3種類の蛍光色素で標識したTaqMan® probe を用いたマルチプレックス検出系にて、赤痢、VTEC 、サルモネラ菌のgDNAの検出を行いました。またPCRの阻害物質として、糞便や全血、唾液を添加した系でも検出を行いました。実験は取扱説明書の反応条件に従って実施し、検出はBio-Rad社 ...
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実施例 THUNDERBIRD Next Probe 実施例6 UNG添加によるキャリーオーバーコンタミネーション防止効果 エンテロウイルスRNAを鋳型とし、dUTPを含むRT-PCR試薬で196bpのターゲットの増幅を行いました。そのPCR産物(10⁴コピー、10³コピー)を鋳型とし、THUNDERBIRD® Next Probe qPCR MixとUracil-DNA Glycosy ...
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実施例 THUNDERBIRD Next SYBR™ 実施例8 シグナル強度・PCR効率の他社品との比較 逆転写反応用試薬 ReverTra Ace® qPCR RT Kit [Code No.FSQ-101]により合成したHeLa細胞total RNA由来のcDNAを用い、cDNAの5倍希釈(6段階)について、伸長時間30秒の通常サイクルと伸長時間10秒の高速サイクルでβ-actinの ...
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実施例 RamDA-seq 実施例9 さまざまなインプットRNA量(2pg～6.25ng)からのRNA-seq解析 HeLa細胞から抽出したRNAを用いて、インプット量を2 pg～6.25 ngの範囲でライブラリー調製を行いました。cDNA合成には、NSR Primer Set for human [Code No. NSR-101]を使用し、ライブラリーエンリッチメントはすべて15サイクルで行い ...
