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実施例 THUNDERBIRD Next SYBR™ 実施例4 調製したPCR反応液の安定性 PCR反応液にプライマー、テンプレート(HeLa細胞total RNA由来のcDNA)を混合した直後または遮光室温で48時間インキュベートした後にターゲットの増幅を行いました。その結果、他社品では、48時間後でCt値の低下が認められましたが、THUNDERBIRD® Next SYBR™ qP ...
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実施例 THUNDERBIRD Next SYBR™ 実施例5 UNG添加によるキャリーオーバーコンタミネーション防止効果 エンテロウイルスRNAを鋳型とし、dUTPを含むRT-PCR試薬で196bpのターゲットの増幅を行いました。そのPCR産物(10⁴コピー)を鋳型とし、THUNDERBIRD®Next SYBR™ qPCR MixとUracil-DNA Glycosylase(UN ...
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実施例 THUNDERBIRD Next SYBR™ 実施例6 通常サイクル・高速サイクルの比較 逆転写反応用試薬 ReverTra Ace® qPCR RT Kit [Code No. FSQ-101]によりHeLa細胞から合成したcDNAを用い、5倍希釈(5段階)について、ターゲット長316bpのβ-actinの増幅を「伸長時間30秒の通常サイクル」および「伸長時間10秒の高速サイク ...
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実施例 THUNDERBIRD Next SYBR™ 実施例7 マウス肝臓における標的遺伝子のmRNA発現量比較 【サンプル】マウス肝臓から抽出したRNA 【サンプル調製方法】 タカラバイオ社のRNAiso PlusでRNAを抽出しマッハライ・ナーゲル社のNucleoSpinRNAで精製後、ABIのhigh capacity cDNA reverse transcripitin kitでRTを行っ ...
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実施例 RamDA-seq 実施例8 2nd鎖合成後の精製工程を省略したシングルセル解析用ライブラリー調製法 GenNext® RamDA-seq® Single Cell Kit [Code No. RMD-101, RMD-101T] の標準フローでは2nd鎖合成後に磁性ビーズを用いた精製を行ったあとに、ライブラリー調製を実施する必要があります。今回、工程の簡便化を目的として、2nd鎖合成後の ...
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実施例 Can Get Signal immunostain 実施例10 ST2細胞におけるリソソームマーカーLAMP-1の検出(免疫染色) 【データご提供】 東京大学 医学部附属病院 薬剤部 試験研究室 青木 重樹先生、苅谷 嘉顕先生 【実験方法】 (1)サンプルの由来:ST2細胞 (マウス骨髄由来ストローマ細胞) ※抗原タンパク質の発現誘導の有無:なし (2)サンプル:Tissue Cu ...
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実施例 KOD One 実施例20 次世代シーケンサー(NGS)のライブラリー増幅 NGSライブラリーの増幅においては、配列による増幅バイアスがないことが重要となります。KOD One® PCR Master Mixは、さまざまな配列を偏りなく増幅することが可能で、NGS分野にも応用できます。 ここではKOD One® PCR Master Mix を用いて、GC率70%の Thermus the ...
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実施例 KOD Mutagenesis 実施例3 種々のサイズのプラスミドをターゲットとした場合の変異導入効率の評価 全長3.3kb～11.3kbの5種類のヒトcDNAクローン(FLJ cDNA Clone: Code No. FLJ-101)に対して、1塩基置換、3塩基欠失、6塩基挿入の変異導入をそれぞれ行い、シーケンシングにて変異導入効率の評価を行いました(変異箇所は、ベクター上の共通領域に設 ...
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実施例 Shin-RamDA-seq 実施例2 Shin-RamDA-seq Kitを用いたリードカバレッジ 平均化したヒト白血病細胞株K562細胞1細胞分からライブラリーを調製してRNA-seq解析を行い、Millefy*を用いてカバレッジを確認しました。Shin-RamDA-seq® Kitを使用したシングルセル解析で、20kb程度の長さを持つNEAT1_2 全長のカバレッジが確認でき、NEA ...
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実施例 Shin-RamDA-seq 実施例3 K562細胞の解析 Shin-RamDA-seq® Kitおよび他社対応Total RNA-seq試薬を用い、1細胞に平均化したヒト由来K562細胞からライブラリー調製を行いました。イルミナ社 MiSeq®を用いてNGS解析を行い、検出転写産物数・遺伝子、カバレッジを比較した結果、Shin-RamDA-seq® Kitの方が高い検出転写産物・遺伝子数 ...
