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実施例 SuperPrep 実施例4 浮遊細胞の96ウェルプレートアッセイおよび遺伝子発現解析の事例 96ウェルプレートを用いるハイスループット遺伝子発現解析には多くは接着細胞が使用されますが、アッセイによっては浮遊細胞を対象としなければいけないケースもあります。しかし、浮遊細胞を96ウェルプレートでアッセイする場合、細胞のロスにより、精度が低くなるおそれがあります。そこで、今回、SuperPre ...
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実施例 RNA-direct 実施例4 1-step Realtime PCRによるプロテインキナーゼ発現定量 リアルタイムPCRを用いて目的の遺伝子の発現量を測定する方法には、まずRNAをcDNAに変換し、それを鋳型としてリアルタイムPCRを行う『2-step反応系』と、RNAを鋳型として逆転写反応とリアルタイムPCRを連続的に行う『1-step反応系』とがあります。1-stepリアルタイムPC ...
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実施例 SuperPrepII 実施例3 バラツキを考慮したアッセイ精度の評価 HeLa S3細胞を96ウェルプレートに2×104cells/wellずつ播種し、100nM phorbol 12-myristate 13-acetate(PMA)を加えて24時間インキュベートしました。その後、PMA処理した12ウェル、未処理の12ウェルについてPBS(-)で細胞を洗浄し、SuperPr ...
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実施例 SuperPrepII 実施例4 種々のqPCR 試薬との組み合わせによる性能比較 SuperPrep® II Cell Lysis & RT Kit for qPCR を用いて、ヒト間葉系幹細胞1×104、1×103、1×102、1×101cells から細胞ライセートを調製し、続いてcDNA 合成 (40 μL 反応系)を行 ...
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実施例 ReverTra Ace qPCR RT Master Mix 実施例3 他社プレミックス試薬との逆転写反応効率(cDNA合成量)の比較 HeLa total RNA 100ngを鋳型に、各社キットの推奨条件にて逆転写反応を行い、続いてリアルタイムPCRにて5種類のターゲットの定量を行いました。 ●cDNA合成 試薬:ReverTra Ace® qPCR RT Master Mix 及び他 ...
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実施例 ReverTra Ace qPCR RT Master Mix 実施例4 鋳型RNA量に対する反応効率の検討 鋳型RNA量に対する逆転写反応効率を評価するため、HeLa total RNA 2pg～2μg(8水準)を鋳型に逆転写反応を行ない、続いてリアルタイムPCRにて5種類のターゲットの定量を行ないました。 ●cDNA合成 試薬:ReverTra Ace® qPCR RT Mast ...
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実施例 ReverTra Ace qPCR RT Master Mix 実施例5 cDNA特異的検出例 -夾雑ゲノムDNA除去性能の確認- リアルタイムPCRによる遺伝子発現解析実験では、cDNAのみを検出することが重要です。多くの場合、エキソンジャンクションを挟む位置にプライマーを設計することで、鋳型RNAに混入したゲノムDNA(gDNA)に由来する増幅を回避することができます。 しかしながら、 ...
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実施例 ReverTra Ace qPCR RT Kit 実施例4 レア発現遺伝子の検出比較例 HeLa細胞において低発現であることが知られているTNF-α、IL-8、及びKRT(Keratin)10のmRNAの検出を各社キットを用い、検出感度を比較しました。 <実験方法> まず、ヒト由来細胞株であるHeLa細胞から精製したTotal RNA 100ngを各社の逆転写キット ...
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実施例 Can Get Signal immunostain 実施例5 肝癌培養細胞のFOXO1染色における従来法との比較検討(免疫染色) 【データご提供】香川大学医学部細胞情報生理学講座 【実験方法】 (1)サンプルの由来:培養細胞・HuH-7 ※抗原タンパク質の発現誘導の有無 :なし (2)サンプル調製法:Tissue Cultured Cells (3)サンプル調製方法、細胞のスライ ...
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実施例 ReverTra Ace -α- 実施例1 PCRに使用する酵素の比較 ReverTra Ace -α-®を用いてHeLa Total RNA(1μg)を鋳型として、cDNA合成を行った後、種々のPCR酵素を用いて、β-actin(838bp)をターゲットとするPCRを行いました。cDNA合成反応は、20μLの系を用いて、42℃で20min.行い、その後、 ...
