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実施例 ReverTra Ace qPCR RT Master Mix 実施例4 鋳型RNA量に対する反応効率の検討 鋳型RNA量に対する逆転写反応効率を評価するため、HeLa total RNA 2pg～2μg(8水準)を鋳型に逆転写反応を行ない、続いてリアルタイムPCRにて5種類のターゲットの定量を行ないました。 ●cDNA合成 試薬:ReverTra Ace® qPCR RT Mast ...
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実施例 ReverTra Ace qPCR RT Master Mix 実施例5 cDNA特異的検出例 -夾雑ゲノムDNA除去性能の確認- リアルタイムPCRによる遺伝子発現解析実験では、cDNAのみを検出することが重要です。多くの場合、エキソンジャンクションを挟む位置にプライマーを設計することで、鋳型RNAに混入したゲノムDNA(gDNA)に由来する増幅を回避することができます。 しかしながら、 ...
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実施例 ReverTra Ace qPCR RT Kit 実施例4 レア発現遺伝子の検出比較例 HeLa細胞において低発現であることが知られているTNF-α、IL-8、及びKRT(Keratin)10のmRNAの検出を各社キットを用い、検出感度を比較しました。 <実験方法> まず、ヒト由来細胞株であるHeLa細胞から精製したTotal RNA 100ngを各社の逆転写キット ...
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実施例 Can Get Signal immunostain 実施例5 肝癌培養細胞のFOXO1染色における従来法との比較検討(免疫染色) 【データご提供】香川大学医学部細胞情報生理学講座 【実験方法】 (1)サンプルの由来:培養細胞・HuH-7 ※抗原タンパク質の発現誘導の有無 :なし (2)サンプル調製法:Tissue Cultured Cells (3)サンプル調製方法、細胞のスライ ...
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実施例 ReverTra Ace -α- 実施例1 PCRに使用する酵素の比較 ReverTra Ace -α-®を用いてHeLa Total RNA(1μg)を鋳型として、cDNA合成を行った後、種々のPCR酵素を用いて、β-actin(838bp)をターゲットとするPCRを行いました。cDNA合成反応は、20μLの系を用いて、42℃で20min.行い、その後、 ...
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実施例 ReverTra Ace 実施例3 14kbのcDNA合成反応 Human骨格筋poly(A) RNAを鋳型に、ジストロフィンmRNAの3'側に特異的なcDNA合成用Primerを用いて、42℃、30min.にてcDNA合成反応を行いました。その後、mRNAの5'側に特異的なPCR用Primer Set(cDNA合成用Primerより14kb上流)を用いて、KOD Dash ...
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実施例 ReverTra Ace 実施例4 GC-richターゲットからのcDNA合成 HeLa細胞より調製したtotal RNA (DNase処理済み)を鋳型にハンチンチンmRNAおよびKIAA0296 (かずさDNA研究所cDNAバンクより引用) mRNA の3'側に特異的なprimerを用いcDNA合成反応を行いました。それぞれを鋳型として各mRNAの5'側に特異的なprim ...
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実施例 ReverTra Ace 実施例5 反応効率・伸長性能と逆転写反応温度の検討 「ReverTra Ace®」の反応効率、および伸長性を確認するために、高次構造を取りやすく、逆転写が難しいとされる18SリボソームRNAを鋳型とした逆転写反応において、他社の逆転写酵素と比較を行いました。 【実験方法】 (1)使用酵素 ・ReverTra Ace® [Code No.TRT-101]、100U/ ...
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実施例 Can Get Signal immunostain 実施例6 アフリカツメガエルの卵巣染色での従来法との比較検討(免疫染色) 【データご提供】 兵庫県立大学大学院 生命理学研究科 織井 秀文先生 【実験方法】 (1)サンプルの由来:アフリカツメガエルの卵巣 (2)サンプル調製法:Paraffin Embedded Section (3)実験フロー 1. ブアン氏の固定液による固 ...
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実施例 KOD Dash 実施例2 マルチPCRによるSTECの病原性関連遺伝子の検出 O157:H7に代表される志賀毒素産生性大腸菌(STEC)は強い感染力と病原性を有し、深刻な疾病を引き起こす危険な細菌である。近年、本菌が猛威を振るい、これまでに死亡例を含め多数の患者が発生している。STECの最も重要な病原因子である志賀毒素(ベロ毒素)は、免疫学的性状や分子量の異なるStx1およびStx2に大 ...
