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実施例 RamDA-seq 実施例7 微量RNAからのcDNA合成 NIH3T3 から抽出したTotal RNA 10pgを用い、RT-RamDA® cDNA Synthesis Kit [Code No RMD-201] とA社qPCR用逆転写キットにて cDNAを合成しました。 このcDNAを鋳型にTHUNDERBIRD® SYBR™ qPCR Mix[Code No QPS-20 ...
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実施例 Can Get Signal immunostain 実施例4 Swiss 3T3のPaxillin, p-Tyr, phalloidinによる3重蛍光染色(免疫染色) 【データご提供】 東京工業大学大学院 生命理工学研究科 原田伊知郎先生 【はじめに】 近年、蛍光顕微鏡の著しい性能の向上のため、蛍光免疫染色法はタンパク質の発現の有無、細胞内タンパク質の局在などの詳細を調べるための有力なツ ...
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実施例 Hot Start TTx (DNA) Kit 実施例3 血漿を添加した場合の増幅への影響 Hot Start TTx(DNA) KitおよびTaq DNA PolymeraseをベースとしたリアルタイムPCR試薬にて、TaqMan® Probeを用いてアフリカ豚コレラウイルスのDNAの検出を実施しました。 20μLの反応液に2.5μLの血漿ありなしで反応を比較した結果、Taq ...
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実施例 Hot Start TTx (DNA) Kit 実施例4 マルチプレックスPCRによる腸内細菌の検出 Hot Start TTx(DNA) KitおよびTaq DNA PolymeraseをベースとしたリアルタイムPCR試薬にサルモネラ・赤痢菌・O157の検出用プライマー・TaqMan® Probeを混合し、各遺伝子(1,000、250、63、15コピー)の検出をマルチプレックスPCRにて ...
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実施例 SuperPrep 実施例4 浮遊細胞の96ウェルプレートアッセイおよび遺伝子発現解析の事例 96ウェルプレートを用いるハイスループット遺伝子発現解析には多くは接着細胞が使用されますが、アッセイによっては浮遊細胞を対象としなければいけないケースもあります。しかし、浮遊細胞を96ウェルプレートでアッセイする場合、細胞のロスにより、精度が低くなるおそれがあります。そこで、今回、SuperPre ...
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実施例 RNA-direct 実施例4 1-step Realtime PCRによるプロテインキナーゼ発現定量 リアルタイムPCRを用いて目的の遺伝子の発現量を測定する方法には、まずRNAをcDNAに変換し、それを鋳型としてリアルタイムPCRを行う『2-step反応系』と、RNAを鋳型として逆転写反応とリアルタイムPCRを連続的に行う『1-step反応系』とがあります。1-stepリアルタイムPC ...
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実施例 SuperPrepII 実施例3 バラツキを考慮したアッセイ精度の評価 HeLa S3細胞を96ウェルプレートに2×104cells/wellずつ播種し、100nM phorbol 12-myristate 13-acetate(PMA)を加えて24時間インキュベートしました。その後、PMA処理した12ウェル、未処理の12ウェルについてPBS(-)で細胞を洗浄し、SuperPr ...
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実施例 SuperPrepII 実施例4 種々のqPCR 試薬との組み合わせによる性能比較 SuperPrep® II Cell Lysis & RT Kit for qPCR を用いて、ヒト間葉系幹細胞1×104、1×103、1×102、1×101cells から細胞ライセートを調製し、続いてcDNA 合成 (40 μL 反応系)を行 ...
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実施例 ReverTra Ace qPCR RT Master Mix 実施例3 他社プレミックス試薬との逆転写反応効率(cDNA合成量)の比較 HeLa total RNA 100ngを鋳型に、各社キットの推奨条件にて逆転写反応を行い、続いてリアルタイムPCRにて5種類のターゲットの定量を行いました。 ●cDNA合成 試薬:ReverTra Ace® qPCR RT Master Mix 及び他 ...
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実施例 ReverTra Ace qPCR RT Master Mix 実施例4 鋳型RNA量に対する反応効率の検討 鋳型RNA量に対する逆転写反応効率を評価するため、HeLa total RNA 2pg～2μg(8水準)を鋳型に逆転写反応を行ない、続いてリアルタイムPCRにて5種類のターゲットの定量を行ないました。 ●cDNA合成 試薬:ReverTra Ace® qPCR RT Mast ...
