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実施例 KOD -Plus- 実施例4 inverse PCRによる部位特異的変異導入 インバースPCRは相同部分のない逆方向の2種類のプライマーを用いてプラスミド全周をPCRで増幅する方法で、プライマーのデザインにより、塩基の置換や挿入、欠失を導入することができます。今回は、pUC19のlacZαペプチドの5'末端にHis-TagとBglⅡsiteを導入しました。(下図) ( ...
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実施例 KOD -Plus- 実施例5 さまざまな鋳型を用いたLong PCR 【方法】 以下のようにPCR mixを作製し、PCRを実施しました。 PCR mix PCR cycles D.W. 33.5(μL) 94℃, 2min 10×KOD -Plus- buffer 5 94℃, 15sec. 2mM dNTPs 5 60℃, 30sec. 3 ...
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実施例 KOD One 実施例4 プラスミドDNA, cDNAをテンプレートとした検出感度の比較 プラスミドDNA、cDNAを用いて、約3.5 kbのターゲットを伸長時間5 sec./ kbで増幅し、検出感度を比較しました。反応はそれぞれのPCR酵素の推奨条件に従って実施しました。 その結果KOD One® PCR Master Mixは他社試薬と比較してより低コピーの領域まで増幅することができま ...
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実施例 KOD One 実施例3 逆転写反応液の持ち込み可能量の確認 逆転写反応液(cDNA)に含まれるRNAはPCRに対して阻害的に働くため 、大量のcDNAの添加は反応阻害につながります。そこで、cDNAの持ち込み可能量を確認するため、cDNAの添加量をふり、TFR遺伝子の検出を行いました。 その結果、KOD One® PCR Master MixはRNAによる阻害を受けにくく、従来品や他社品 ...
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実施例 KOD One 実施例5 イノシンを含むプライマーを用いた増幅 イノシンを含む縮重プライマーを用いて、KOD -Plus- Neo(従来品)との増幅を比較しました。その結果、KOD One® PCR Master Mix(色素なし, 入り)でのみ明確なバンドを確認することができました。本製品を用いることで、従来の高正確性PCR酵素では使用できないイノシンを含む縮重プライマーから、正確に遺伝 ...
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実施例 KOD One 実施例6 相補的なプライマーを用いる変異導入(Site-Directed Mutagenesis) <実験の目的> 相補的なプライマーを用いた変異導入法による、約5 kbのプラスミドへ変異導入(3塩基置換、3塩基欠損、3塩基挿入)を実施。 <実験方法> 【サンプルの種類】 プラスミドDNA 【サンプルの調製方法】 組換え大腸菌からミニプレップにて精製 ...
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実施例 Can Get Signal 実施例5 マウス海馬内のNR2A (NMDA receptor subunit)発現量の検出(ウェスタンブロット) 【データご提供】 東京大学医科学研究所神経ネットワーク分野 【実験方法】 1. サンプルの調製 ●サンプルの由来:マウスの海馬 ●サンプル:Tissue Homogenate(細胞・組織 ライセート) 2. タンパク質のウェスタンブロッテ ...
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実施例 KOD -Plus- 実施例8 ヘパリン含有サンプルを用いたPCRにおけるBetaine添加効果 血液中にはPCRの阻害物質が多く含まれており、これを鋳型としたPCRは成功しにくいことが知られています。 これまでに血液をサンプルとしたPCRにおいてはTaq DNA polymeraseよりもTth DNA polymeraseが有利なことや、血液中の阻害物質はHemoglobin、Lact ...
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実施例 KOD -Plus- 実施例6 Colony direct-PCRによる黄色ブドウ球菌の遺伝子プロフィール解析 【データご提供】 国立感染症研究所生物活性物質部, 日本微生物クリニック株式会社 技術部 土崎 尚史 様 国立感染症研究所生物活性物質部 堀田 国元 様 【はじめに】 PCRの鋳型としてインタクトの菌体をコロニーから反応液へ直接添加し、そのままPCRを行うColony direc ...
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実施例 KOD -Plus- 実施例7 Colony direct-PCRによる各種微生物遺伝子の簡便・迅速検出 【データご提供】 国立感染症研究所生物活性物質部, 日本微生物クリニック株式会社 技術部 土崎 尚史 様 国立感染症研究所生物活性物質部 堀田 国元 様 一般的にCD-PCRの適用例が比較的稀と思われるS. aureus以外のグラム陽性菌、グラム陰性菌および真菌(酵母)を対象にしたCD ...
