実施例

データご提供　:　名古屋大学大学院創薬科学研究科基盤創薬学専攻細胞生化学研究室辰川英樹様

<実験の目的>
　尿細管細胞のコラーゲン産生量の定量

<実験方法>

【サンプル】ヒト尿細管上皮細胞株由来cDNA 【遺伝子名】 Collagen type I 【ターゲット長】 83 bp 【反応液組成】 THUNDERBIRD^® SYBR™ qPCR Mix 1 sample あたり、 dH2O 2.6 μL 10 mM F primer 0.2 μL 10 mM R primer 0.2 μL THUNDERBIRD^® SYBR™ qPCR Mix 5 μL cDNA 2 μL Total 10 μL	【サンプルの調製方法】 Tissue Total RNA Mini Kit (FAVORGEN) でTotal RNA を精製し、ReverTra Ace^®を用いて逆転写してcDNAを調製【プライマー配列】 Forward: CCTGCGTGTACCCCACTCA Reverse: ACCAGACATGCCTCTTGTCCTT
	【PCRサイクル】
	95℃ 15 sec.
	55℃ 15 sec.	50 cycles
	72℃ 30 sec.

	【測定機器】
	Illumina Eco

<結果・考察>

コラーゲン検出のためのプライマーを用いてスタンダードサンプルをPCRをした結果、融解曲線はシングルピークを示し、増幅曲線は定量性のある希釈系列の曲線を描くことができた。
THUNDERBIRD^® SYBR™ qPCR Mixを使用することで、コラーゲン産生の経時的な変化を確認することができた。

<感想・ご意見等>

操作が簡便であるにも関わらず、点線のthreshold の位置で非常に綺麗な希釈系列の曲線を描くことができた。実際の得れたデータも再現性が良く、大変満足いく結果が得られている。

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