実施例
RNA-direct 実施例5 TaqMan® プローブアッセイにおけるマルチプレックス性能比較
- RNA-direct ® Realtime PCR Master Mix -ROX Free-[Code No. QRT-101RF]を用い、RSウイルス、インフルエンザウイルス、SARS-CoV-2を検出するマルチプレックスPCRを行いました。検出にはTaqMan® Probeを用い、各RNA 6,400コピー、400コピー、50コピーを検出しました。
| 【使用機器】 | BIORAD社 CFX96 Touch Deep Well | |
| 【プライマー、プローブ】 | ||
| アメリカ疾病予防管理センター(CDC)発行の配列を採用 | ||
| 【反応液組成】 | ||
| Nuclease-free Water | XμL | |
| RNA-direct ® Realtime PCR Master Mix -ROX Free- | 10μL | |
| 50mM Mn(OAc)2 | 1μL | |
| RSウイルス | 各Primer | 5pmoles each |
| Probe [FAM] | 4pmoles | |
| ウイルスRNA | 2μL | |
| インフルエンザウイルス | 各Primer | 5pmoles each |
| Probe [ROX] | 2pmoles | |
| ウイルスRNA | 2μL | |
| SARS-CoV-2 | 各Primer | 5pmoles each |
| Probe [Cy5] | 2pmoles | |
| ウイルスRNA | 2μL | |
| Total Volume | 20μL | |
| 【サイクル条件】 | |||
| RNA-direct ® Realtime PCR Master Mix -ROX Free- | |||
| 90℃ | 30 sec | ||
| 60℃ | 20 min | ||
| 95℃ | 5 sec | ||
| 55℃ | 45 sec | ×45 | |
| 他社製品(メーカー推奨サイクルで実施) | |||
| 90℃ | 3min | ||
| 60℃ | 5min | ||
| 95℃ | 5 sec | ||
| 60℃ | 30 sec | ×45 | |
その結果、他社試薬では増幅がばらついているところも、RNA-direct ® Realtime PCR Master Mix -ROX Free-では安定な検出が可能でした。
RNA-direct ® Realtime PCR Master Mix -ROX Free-[Code No. QRT-101RF]は、RNA-direct ® Realtime PCR Master Mix[Code No. QRT-101]からパッシブリファレンスのROXを抜いた組成になっています。ROX標識したプローブの検出にも使用でき、マルチプレックスPCRなどにご利用になれます。
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