EvaGreen® 蛍光色素を用いたインターカレーションアッセイキット
ノロウイルス検出キット G1/G2 -融解曲線解析-
TOYOBO
価格表
用途
●ノロウイルス遺伝子の検出
説明
ノロウイルス検出キット G1/G2 -融解曲線解析- は、急性胃腸炎を引き起こす食中毒の原因として知られているノロウイルスを検便検体から1-step RT-PCR法で増幅し、EvaGreen®蛍光色素を用いる融解曲線解析により検出するキットです。弊社の高性能逆転写酵素ReverTra Ace®とrTaq DNA Polymeraseを組み合わせ、バッファーを最適化することによって高効率な1-step RT-PCRを実現しました。2-step RT-PCR法と同等の感度を保ちつつ、短時間(約2時間30分)で作業を終了できます。
※本製品は、大量調理施設衛生管理マニュアル(平成9年3月24日衛食第85号別添(最終改正:平成29年6月16日付け生食発0616第1号)に記載のノロウイルス検査法に対応しております。
特長
●核酸抽出精製不要
弊社独自技術で核酸抽出精製不要のPCRを実現しました。検便検体は反応阻害物質を分解する成分を含む専用の懸濁液※に懸濁します。その後、遠心分離上清を専用の前処理液に加え、85℃1分間の加熱処理をするだけでRT-PCRに使用できます。
●従来法と同等の感度で検出可能
50コピー/テストまで検出可能です。1-step RT-PCRにおいても、従来法と同等の検出感度を実現しました。
●簡便
1-step RT-PCR法を採用しているため、逆転写(RT)反応終了後にPCR試薬を混合する作業は不要です。
●迅速
タッチダウンサイクルの採用により、高い感度と特異性を維持しつつ、さらなる解析時間の短縮が可能になりました。
リアルタイムPCR装置に反応液をセットしてから約2時間30分で結果を確認することが可能であり、当日報告検査の受付時間を延長することができます。
●必要な試薬をすべて添付
本製品には解析に必要なすべての試薬が含まれています。融解曲線解析に使用するインターカレーション蛍光色素EvaGreen®もキットに含まれています。
実施例
検出限界コピー数の検討
本Kitを用いて、表示のコピー数のG1またはG2RNAを陰性糞便の前処理液に添加した場合の検出結果を示します。いずれのタイプのRNAも50コピーを検出しています。
(参考)ノロウイルスの流行株の判定や感染源の特定における弊社キットの活用例 - * - * -
(配列解析用サンプル調製)イノシンを含むプライマーを用いた1-step RT-PCRによるノロウイルス遺伝子の増幅
- 製品内容
懸濁液 20mL×1本 前処理液 400μL×1本 反応液 3mL×1本 酵素液 500μL×1本 プライマー液(G1/G2) 500μL×1本 EvaGreen® 液 500μL×1本
- 基本反応条件
反応液組成 反応液 30μL 酵素液 5μL プライマー液(G1/G2) 5μL EvaGreen® 液 5μL 前処理済懸濁液 5μL Total 50μL
サイクル条件 Bio-Rad CFX96 TouchTM Deep Well UNG反応 20℃ 5min. 逆転写反応 42℃ 5min. プレ変性 95℃ 5min. 変性
会合・伸長95℃
56℃
60℃10sec.
30sec.
20sec.20cycles 変性
会合・伸長95℃
54℃
60℃10sec.
30sec.
20sec.25cycles 変性
融解曲線
解析95℃
68℃
88℃10sec.
30sec.
0.5℃/
ステップ
装置により、最適なサイクル条件が異なりますので、詳しくは東洋紡テクニカルラインまでお問い合わせください。
融解曲線データから陽性または、陰性を判定するソフトウェアをご用意しております。製品ご購入の方に無償でご提供いたします。詳しくは東洋紡テクニカルラインまでお問い合わせください。
- 備考
EvaGreen® は、Biotium, Inc.の登録商標です。
- ※ 法規制について
- 毒: 毒物及び劇物取締法[医薬用外毒物]
- 国: 国民保護法[毒素]
- 劇: 毒物及び劇物取締法[医薬用外劇物]
- 組: カルタヘナ法(遺伝子組換え生物等の使用等の規制による
- 危: 消防法[危険物]
- 生物の多様性の確保に関する法律)
- P: PRTR法(化学物質排出把握管理促進法)[届け出義務物質]
- 申: ご購入時に申込書の提出が必要な製品
- 労: 労働安全衛生法[通知または表示義務物質]
- なし: 上記法令や申込書の提出に該当しない製品