腸内細菌遺伝子検出キット -高速蛍光検出-

腸内細菌遺伝子検出キット-高速蛍光検出-は、食中毒原因菌として知られるサルモネラ、腸管出血性大腸菌(EHEC)、赤痢菌の遺伝子をマルチプレックスPCRにて増幅し、EvaGreen^® 蛍光色素による融解曲線解析で検出するキットです。
最短1時間で解析が完了するため、迅速な陰性判定を行うことが可能です。

●より迅速、反応時間を大幅に短縮
東洋紡独自技術により、高い感度と特異性を維持しつつ、解析時間の短縮が可能になりました。装置によってPCR、融解曲線解析時間が異なりますが、50 分～ 1 時間20 分程度で解析が終了し、迅速に陰性判定を行うことができます。


●簡便
弊社独自技術で核酸精製不要のPCRを実現しました。面倒なDNA精製は必要なく、検便検体を水に懸濁し、加熱処理と遠心分離を行ったものをPCRに使用します。
また、本製品はマルチプレックスPCRにより3菌種を一つの反応で検出できるため、リアルタイムPCR装置に反応液をセットするだけで、チューブを開けることなく、1チューブで3菌種を検出することが可能です。

●さまざまなリアルタイムPCR装置に対応
Bio-Rad CFX96 Touch^TM Deep Well リアルタイムPCR 装置では、1 時間で解析が可能です。その他の装置につきましても、装置に適合したサイクル条件をご用意しております。

●必要な試薬をすべて添付
融解曲線解析に使用するインターカレーション蛍光色素EvaGreen^®も含まれますので、本製品に含まれるすべての試薬を混合し、糞便熱処理液を添加するのみで解析が可能です。
※東洋紡は、米国Biotium Inc.とのライセンス契約のもとEvaGreen^®をキットに使用しています。お客さまでのライセンス契約は必要ありません。

●キャリーオーバー汚染のリスクを低減
偽陽性の発生原因として、キャリーオーバー汚染があります。本製品は、PCRから蛍光検出までをチューブを開けることなく、1チューブで検出することができるため、キャリーオーバーのリスクが低減しています。さらに、Uracil-DNA Glycosylaseを含むため、10³～10⁴コピー/反応程度の混入したPCR増幅産物を分解し偽陽性を防止することが可能です。

●検便検体のスクリーニングに利用可
本製品は、50検体からプールした糞便検体の腸内細菌を検出が可能な感度を有しているため、検便検査のスクリーニングに使用することができます。スクリーニングを実施する利点として下記の3点が挙げられます。

1)検査当日に90～95%の陰性検体を判定できます。
スクリーニングは数時間で完了できますので、検査当日に90～95%の陰性を判定することができます。陽性となったプールに含まれる検体は、個別に培養法にて検査し陽性を判定します。

2)塗沫培養の検体数を10分の1以下に低減できます。
90～95%程度の陰性検体を排除できますので、培養法の検体数を全検体数の約10分の1以下に低減できます。

3)判定が簡便です。
ピークの検出により判定を行うため、コロニーの色や形状による判定に比べ判定が簡便です。

1.検出感度の確認
サルモネラゲノムDNA、腸管出血性大腸菌ゲノムDNA、赤痢菌ゲノムDNAをそれぞれ10コピー/反応になるように陰性糞便の熱処理液に添加したものをサンプルとして、本製品を用いてPCRを行った後、融解曲線解析により検出を行いました。解析にはBio-Rad CFX96 Touch^TM Deep Wellリアルタイム解析システムを用いました。その結果、いずれの遺伝子も10コピーにおいて明確なピークが認められました。また、陰性糞便の場合は、内部標準(インターナルコントロール)のピークのみが検出され、陰性と判定されました。