高効率・高成功率PCR Master Mix

KOD FLEX PCR Master Mix (近日発売)

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TOYOBO

価格表

Code No. 包装 価格(税別) 保存温度 説明書
仕様書
SDS 法規制
KMX-101 1mL×5本 ご照会 -20℃ なし
KMX-101X5 (1mL×5本)×5 ご照会 -20℃ なし

用途

●PCR

説明

KOD FLEX™ PCR Master Mixは、高効率・高成功率のPCR用2×マスターミックスです。改変型KOD DNA polymerase(UKOD)、及び伸長アクセラレーター、独自のBufferシステムを応用し、増幅しにくいターゲットを高効率かつ低バイアスに増幅することが可能です。

増幅しにくい、高GC/ATターゲットやLongターゲット、特異的に増幅しにくいターゲットでも効率的な増幅が可能です。生体サンプルなどクルードなサンプルからでも増幅が可能です。

Taq DNA polymeraseの約11倍の正確性を示すため、得られた増幅産物はクローニングを介した従来のシーケンス解析にも用いることができるとともに、配列や増幅サイズなどによる 増幅バイアスを受けにくいという特長があり、次世代シーケンスにおけるライブラリー増幅に適しています。 本酵素には、Polymerase活性と3’→5’Exonuclease活性を抑える2種類のモノクローナル抗体が混合されており、簡便 に特異性の高いHot start PCR を行うことができます。

特長

● 高成功率・伸長性 

● クルードサンプルに対応 

● 均一な増幅(低バイアス)

● 高正確性 

● ウラシル・イノシンを含むDNA・プライマー からの増幅

実施例

1.長鎖ターゲットの増幅

ヒトゲノムをテンプレートとして、長鎖のターゲットを増幅しました。
他社品はその酵素の推奨条件に従って行いました。
その結果、KOD FLEX™ PCR Master Mix では40 kbと非常に長いターゲットでも増幅を確認できました。


 

2.高GC/ATターゲットの増幅

ヒトゲノムをテンプレートとして、GC含有率が70%程度の高GC領域、及びGC含有率が30%程度の高AT領域を増幅しました。他社品はその酵素の推奨条件に従って行いました。
その結果、KOD FLEX™ PCR Master Mix では高GC領域、高AT領域共に安定した増幅が確認できました。

製品内容
【KMX-101】
Master Mix 


1mL×5本

基本反応条件
  (μL)
滅菌蒸留水
KOD FLEX PCR Master Mix
Primer(10μM each)
Template DNA
  Genomic DNA ~200ng
  Plasmid DNA    ~50ng
  cDNA ~200ng(RNA相当量)
  生体試料・粗抽出液~5μL                       

X
25
1.5
Y



 

Total Volume 50


サンプルにより、調製方法やPCRサイクルが異なりますので、詳細につきましては取扱説明書をご覧ください。

ワンポイントアドバイス

PCR産物のクローニング
本酵素のPCR産物は平滑化されているため、平滑末端クローニング法によってクローニングできます。
その際、ベクター側を脱リン酸化処理している場合、リン酸化を行ったPCR産物を用いるか、リン酸化プライマーを用いて増幅したPCR産物を用いる必要があります。
また、本酵素のPCR産物は平滑化されているため、そのままではTAクローニングすることはできません。専用の高効率TAクローニングキット「TArget Clone™ -Plus-」を用いると簡便・高効率にTAクローニングが可能です。

●プライマーについて
可能な限り、22~35mer程度(Tm値>60℃)をご使用ください。(長鎖ターゲットの場合は、25~35mer程度(Tm値>65℃))
GC含量を45~60%として、5’側の半分は60~70%, 3’側の半分は40~50%のGC含量になるように設計することで特異性を高めることができます。
 3’末端をGかCで設計することでプライミング効率を高めることができますが、 3’端領域にGCが偏りすぎるとスメア、エキストラバンドが出やすくなるのでご注意ください。

プライマーのTm値の計算は、最近接塩基対法(Nearest Neighbor method)を用いております。プライマーのTm値計算表(EXCEL)は、こちらからダウンロードできます。イノシンを含むプライマーのTm値はこの方法では計算できません。

※ 法規制について
毒: 毒物及び劇物取締法[医薬用外毒物]
国: 国民保護法[毒素]
劇: 毒物及び劇物取締法[医薬用外劇物]
組: カルタヘナ法(遺伝子組換え生物等の使用等の規制による
危: 消防法[危険物]
   生物の多様性の確保に関する法律)
P: PRTR法(化学物質排出把握管理促進法)[届け出義務物質]
申: ご購入時に申込書の提出が必要な製品
労: 労働安全衛生法[通知または表示義務物質]
なし: 上記法令や申込書の提出に該当しない製品

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