実施例

KOD FLEX 実施例7 酵母からのダイレクトPCR

4℃で一週間保存した酵母培養プレートから以下のように調製した菌株をテンプレートとして、ダイレクトPCRを実施しました。
 

【結果】の電気泳動写真の奇数レーン:単一コロニーを採取し、反応液に直接入れてPCRを実施。
【結果】の電気泳動写真の偶数レーン:単一コロニーを採取し、20 μLの滅菌水で懸濁した溶液の2 μLでPCRを実施。

【反応液の調製】

	液量
KOD FLEX PCR Master Mix	10μL
Primer F (10μM)	0.6μL
Primer R (10μM)	0.6μL
Template	XμL
Autoclaved distilled Water	To 20μL

【サイクリング条件】

温度	時間	サイクル数
98℃	10分	1
98℃	10秒	35
Tm-5℃	10秒
68℃	30秒/kb

他の製品はその酵素の推奨条件に従って行いました。


【結果】


 
 Lane M: DNAラダーマーカー
 Lane 1, 2: 高正確性酵素 A (ターゲット長 2kb)
 Lane 3, 4: KOD FLEX PCR Master Mix (ターゲット長 2kb)
 Lane 5, 6: 高性能酵素 B (ターゲット長 2kb)
 Lane 7, 8: 高正確性酵素 A (ターゲット長 6kb)
 Lane 9, 10: KOD FLEX PCR Master Mix (ターゲット長 6kb)
 Lane 11, 12: 高性能酵素 B (ターゲット長 6kb)

他の製品と比較して、KOD FLEX PCRマスターミックスは酵母のダイレクトPCRにおいて高い性能を示し、長鎖断片のダイレクトPCRにも使用できます。操作手順は、98℃で10分間の初期変性ステップを追加する点を除き、大腸菌のダイレクトPCRと同様です。


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