MagExtractor™ –Plasmid-

大腸菌から高純度のプラスミドDNAを抽出するためのキットです。抽出したプラスミドは、シーケンスやさまざまな酵素反応、及び形質転換等に直接用いることができます。
本キットは、磁性シリカビーズに、破砕溶液中のプラスミドDNAを吸着させて回収する方法を原理としており、フェノールなどの有害な試薬による除タンパク操作やエタノール沈殿操作が不要です。また、高速遠心機による遠心分離操作を最小限に減らしています。
また本キットはマニュアルキットとして使用した場合、1サンプル当たり¥66とコストパフォーマンスに優れます。
本キットは、磁性ビーズ分離用スタンドを用いて使用できます。

●低コスト

マニュアルキットとして、1サンプル当たりのコストはわずか66円です。
 

●簡便・短時間

磁性シリカビーズへのプラスミドDNAの吸着を基本原理としており、簡便に短時間でプラスミドDNAを抽出できます。
 

●安全

有害なフェノール/クロロホルム処理を必要としません。
 

●高純度のプラスミドDNA精製が可能

本キットで抽出されたプラスミドDNAは、ゲノムDNA、RNA、タンパク質等の不純物をほとんど含まず、さまざまな用途に使用可能です。

1.抽出したプラスミドの制限酵素処理

pUC18を保持するJM109形質転換体の終夜培養液1.2mLより、プラスミドを本キット及び他社キットによって抽出を行いました。その結果、タンパク質やゲノムDNA、RNAの混入がほとんどなく、他社キット比べて同等以上の収量でプラスミドを得ることが可能でした。またさらに、得られたプラスミドの一部を制限酵素で切断した結果、他社キット同様に、完全に消化されていることが確認できました。
このように、本キットを使用することによって、大腸菌などのバクテリアから、高純度のプラスミドを抽出することができます。
 

2.抽出したプラスミドのシーケンス解析

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本キットで抽出したpUC18を0.5μg使用して、ABI PRISM 310 Genetic Analyzerによってシーケンスを行いました。シーケンスプライマーはM13 Primer P8を使用し、シーケンスキットとして、dRhodamine Terminator Cycle Sequencing FS Ready Reaction Kit(PE Applied Biosystems)を使用しました。
　その結果、本キットで抽出したプラスミドは、オートシーケンサーにも充分使用できる品質を保持していることが確認できました。

1)B. Vogelstein and D. Gillespie, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 76:615-619(1979)
2)R. Boom et al., J. Clin. Microbiol., 28: 495-503(1990)