Realtime PCR Master Mix シリーズ

Taq DNA polymerase をベースとして開発された、汎用性の高いリアルタイムPCR用の2×マスターミックスで、再現性に優れた良好な結果を得ることができます。

また、パッシブリファレンスが必要な機器やガラスキャピラリーを使用する機器など、さまざまなタイプのリアルタイムPCR装置に対応しています。

それぞれの試薬は、以下のように対応します。

*逆転写酵素「ReverTra Ace^® 」[Code No. TRT-101]とRNase inhibitor [Code No. SIN-201] の組み合わせにより、1-step PCRを行うことができます。
**TaqMan^® probeアッセイやHybridization probeアッセイなどに使用できます。

●高い特異性
非特異反応を抑えるために、抗Taq抗体によるホットスタート法を採用しています。

●さまざまな用途に応用可能
プローブアッセイやSYBR™ Green I アッセイなどに対応します。

●タイプの異なる機器に対応
パッシブリファレンス色素を含有しており、補正が必要な測定機器(Applied  Biosystems^® StepOnePlus^TM など)に対応します。ガラスキャピラリーを用いるタイプの測定機器(Roche Diagnostics社のLightCycler^®など)にも対応します。

●リライアビリティーアップ [SYBR™ Green Realtime PCR Master Mix -Plus-(QPK-212)]
バッファー組成を最適化することにより、SYBR™ Greenアッセイ時に問題となるプライマーダイマーなどの発生を抑え、特異性と再現性を向上させています。

●高純度なTaq DNA polymeraseを使用
PCRの基本性能の改善を図っております。

1. SYBR™ Greenアッセイ系での他社品との反応性比較 [QPK-201]

SYBR™ Greenアッセイ系の他社試薬と反応性の比較を行いました。 ヒトゲノムDNAを10倍ずつ段階希釈(30ngから3pgまでの5水準)したものをサンプルとして、β-actin遺伝子配列をターゲットとするPCRを実施しました。その結果、本製品を用いた場合増幅効率・立ち上がりの点で優れていることが分かりました。また、プライマーダイマーの生成も顕著ではありませんでした。

2. インターカレーターアッセイの検討 [QPK-201]

逆転写キットReverTra Ace -α-^® [Code No. FSK-101]を使用し、HeLa細胞由来Total RNA(100ng)を鋳型としてrandom primerにて1st strand cDNA合成を行った後、10倍希釈をスタートとして5倍ずつ段階希釈し、β-actin遺伝子の検出しました。その結果、いずれの濃度でも良好な増幅曲線を得ることが出来ました。

      増幅していない曲線Dはブランク(蒸留水)です。







 

3. 他社品との性能比較 [QPK-212]

げっ歯類由来ゲノムDNA (10n倍希釈系列、10ng、1ng、0.1ng、0.01ng(n=2))を鋳型とし、インターカレーターアッセイによるターゲット遺伝子(約80bp)の検出を行いました。その結果、A社試薬では、非特異的増幅、及びプライマーダイマーの生成が認められましたが、SYBR™ Green Realtime PCR Master Mix -Plus-では、良好な増幅が確認できました。また、Ct値の間隔も、等間隔であり、ダイナミックレンジ(測定可能範囲)も広い傾向が認められました。

4. TaqMan^® アッセイの検討 [QPK-101]

弊社逆転写キットReverTra Ace -α-^® [Code No. FSK-101]を使用し、HeLa細胞由来Total RNA(100ng)を鋳型としてrandom primerにて1st strand cDNA合成を行った後、10倍希釈をスタートとして5倍ずつ段階希釈し、アプライドバイオシステムズ社Pre-Developed TaqMan^® Assay Reagents β-actinを用いて TaqMan^® アッセイを行いました。その結果、いずれの濃度でも良好な増幅曲線を得ることが出来ました。増幅していない曲線はブランク(蒸留水)です。