高効率cDNA合成キット
ReverTra Ace -α-®
TOYOBO
価格表
用途
●RT-PCR用cDNA合成
説明
本キットで使用している ReverTra Ace® は、高温反応性と反応効率を向上させた改変型M-MLV RTase(RNaseH-)であり、従来のRTaseに比べ長いcDNAの合成が可能です(14kbまでのcDNA合成を確認しています)。
特長
●高効率
高効率逆転写酵素「ReverTra Ace®」を使用しており、高効率なcDNA合成を行うことができます。
●広い応用範囲
Random Primer、Oligo dT Primer、及びSpecific Primerを用いる逆転写反応が可能であり、さまざまな場合に応じて使用することができます。
実施例
PCRに使用する酵素の比較
ReverTra Ace -α-®を用いてHeLa Total RNA(1μg)を鋳型として、cDNA合成を行った後、種々のPCR酵素を用いて、β-actin(838bp)をターゲットとするPCRを行いました。cDNA合成反応は、20μLの系を用いて、42℃で20min.行い、その後、99℃で5min.処理しました。その後、cDNA合成反応液に80μLのPCR溶液を加え全量を100μLとした後、PCRを行いました。
その結果、すべての場合において増幅が確認でき、ReverTra Ace -α-®の逆転写産物は、さまざまなPCR酵素を用いる増幅に適用できることが確認できました。
(実施例詳細はこちら)
参考文献
1)Hatta M. et al., Intl. J. Mol. Med., 9: 147-152 (2002)
<製品使用文献>
1)WANG Y. et al., Mol. Med. Rep. 17: 3690-3696 (2018)
- 製品内容
ReverTra Ace® 100μL×1本 5×RT Buffer* [TRT-1B] 400μL×1本 Random Primer (9mer)[FSK-301] 100μL×1本 Oligo(dT)20 Primer
[FSK-201]100μL×1本 10mM dNTPs [NTP-301] 200μL×1本 RNase Inhibitor 100μL×1本 RNase Free H2O 1.2ml×1本
*5×RT BufferはReverTra Ace®用Bufferと同一組成です。
G3PDHは偽遺伝子が多いため、サンプルに用いる場合には、サンプルをDNase処理することをお勧めします。
- 基本反応条件
-
〈cDNA合成〉
滅菌蒸留水 XμL
鋳型RNA
total RNA 100-1000ng
mRNA 10-100ng
Primer
Oligo(dT)20 Primer 1μL
Random Primer 1μL
Specific Primer 10pmoles*
5×RT Buffer 4μL
10mM dNTPs 2μL
ReverTra Ace® 1μL
RNase Inhibitor 1μL
Total Volume 20μL
*このプライマーはPCR用の3'Primer(アンチセンス鎖と同じ配列になります)と同じです。
30℃, 10min.**
42℃, 20min.
99℃, 5min.
**この反応はRandom Primerの場合のみ必要です。
- ワンポイントアドバイス
● PCR反応液への持ち込み量
TaqベースのPCR酵素、及びKOD Dashの反応には最大20%、KOD -Plus- series、及びKOD FX seriesの反応には最大4%、好ましくは2%以下の逆転写反応液を用いることをお勧めします。
●鋳型RNA
鋳型RNAとして、total RNA、mRNA、tRNA、及びrRNAが使用できます。いずれの場合でも純度の高いサンプルを使用した方が、良好な結果を得ることができます。
●コントロール系
サンプルを初めてRT-PCRする場合には、コントロール実験も同時に行うことをお勧めします。
トラブルシューティングは
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English Page
- ※ 法規制について
- 毒： 毒物及び劇物取締法[医薬用外毒物]
- 国： 国民保護法[毒素]
- 劇： 毒物及び劇物取締法[医薬用外劇物]
- 組： カルタヘナ法(遺伝子組換え生物等の使用等の規制による
- 危： 消防法[危険物]
- 生物の多様性の確保に関する法律）
- Ｐ： PRTR法（化学物質排出把握管理促進法）[届け出義務物質]
- 申： ご購入時に申込書の提出が必要な製品
- 労： 労働安全衛生法[通知または表示義務物質]
- なし： 上記法令や申込書の提出に該当しない製品
