RNase Inhibitor, Recombinant

本タンパク質は、ヒト胎盤に由来する分子量51kDaの組換えタンパク質であり、RNaseAと1:1で複合体を形成し、可逆的な非拮抗阻害を示します。

RT-PCR時のRTase反応時に添加することで、安定した結果を得ることが可能です。

●広い範囲のpHで活性を保持

DTT存在下ではpH5～8の範囲で使用可能です。

1. 組換え型RNase Inhibitor の由来の違いによる阻害効果の比較

ヒト胎盤(東洋紡製品)、ブタ肝臓、マウス由来の組換えRNase Inhibitorを それぞれU937 2,500 細胞に加えたのち、プロテイナーゼKで細胞を溶解しました。そのライセートを鋳型にcDNAを合成し、合成量をqPCRで測定しました。

グラフは、ヒト胎盤由来の組換えRNase Inhibitor を用いた場合に合成されたcDNA量が最も多いことを示しています。この結果から、RNase Inhibitorは由来によって、RNase を阻害する効果が異なり、ヒト胎盤由来のRNase Inhibitorは他の動物種由来のものよりも、RNaseを阻害する能力が高いことがわかりました。

 

2. qRT-PCRにおける、RNase Inhibitor 添加の効果

RNase活性が高いU937細胞 : 100, 1,000, 10,000細胞を溶解し、本製品 5, 20, 40, 80Uを加えました。細胞ライセートからcDNAを合成し、qPCRを行いました。

Ct値を解析したところ、RNase Inhibitor量の増加に従い、Ct値が減少する結果となりました。このことから、十分量のRNase Inhibitorを添加することにより、RNA分解が阻害され、実験精度が上がることがわかりました。
 

3. 熱安定性の確認

RNase Inhibitorを 37-70℃で0-60分、熱処理したのち、活性を測定しました。その結果、50℃、60分熱処理を行った場合においても未処理と変わらない活性を保っていることがわかりました。このことから本製品は、反応温度が30-50℃の範囲で、RNaseを安定して阻害することが示されました。

1)J. Sambrook, et al., Molecular Cloning A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory (1982)
2)G. Scheele and P. Blackburn, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 76:4898-4902(1979)
3)P. Blackburn, et al., J. Biol. Chem., 252: 5904-5910(1977)
4)P. Blackburn and B. Jailkhani, J. Biol. Chem., 254: 12488-12493(1979)