リアルタイムPCR用のcDNA合成に最適化された、プレミックスタイプの逆転写試薬です。

リアルタイムPCR用cDNA 合成試薬完全プレミックスタイプ ReverTra Ace® qPCR RT Master Mix
シリーズ

製品サンプル請求一覧

価格表

ReverTra Ace® qPCR RT Master Mix

Code No. 包装 価格 キャンペーン価格 保存温度 取扱説明書
データシート
SDS 法規制※1
FSQ-201 200回用
(10μl反応)
¥38,000 ¥22,800 -20℃ 取扱説明書 SDS 該当無し

ReverTra Ace® qPCR RT Master Mix with gDNA Remover

Code No. 包装 価格 キャンペーン価格 保存温度 取扱説明書
データシート
SDS 法規制※1
FSQ-301 200回用
(10μl反応)
¥40,000 ¥24,000 -20℃ 取扱説明書 SDS 該当無し

用途

●リアルタイムPCR用のcDNA合成

説明

ReverTra Ace® qPCR RT Master Mix シリーズは、高効率逆転写酵素「ReverTra Ace®」を用いて開発された、リアルタイムPCR用の逆転写反応キットです。逆転写反応に必要な成分を全て含んだ5x濃度の完全プレミックス試薬であり、鋳型RNAと水を添加するだけで、迅速に反応を開始することができます。
ReverTra Ace® qPCR RT Master Mix with gDNA Remover は、さらに強力なDNA分解活性を有するgDNA Removerを付属しており、逆転写反応前に鋳型RNAを処理することによって、ゲノムDNAフリーのcDNAを簡便に調製することができます。検出するターゲットに偽遺伝子が存在する場合や、イントロンをまたぐ位置にプライマーを設定できない場合など、鋳型RNAにコンタミするゲノムDNAの残存が問題となるリアルタイムPCR実験に最適です。

特長

リアルタイムPCR試薬との高い適合性
リアルタイムPCRの反応系への影響を最小限に抑える組成を採用しており、最大で20%液量の逆転写反応液をPCRに添加した場合でも、高い直線性を示します。発現量が少ないmRNAの高感度検出にも最適です。

簡便、迅速にゲノムDNAを除去
ゲノムDNA除去試薬と逆転写反応試薬を順次添加するだけの約20分の操作で、ゲノムDNAフリーのcDNAの調製が可能です。

完全プレミックス試薬
-20℃においても凍結しない完全プレミックスタイプの試薬です。鋳型RNAと水を加えるだけの操作で、簡便に再現性良くcDNAを合成することができます。

逆転写反応(-)コントロールの調製が容易
プレミックスタイプのno-RT Controlが付属していますので、逆転写反応(-)のコントロールも容易に調製することができます。

幅広いダイナミックレンジを実現
Oligo dT とRandom Primerの最適な混合比を持つプライマーミックスの採用により、RNAの全領域を均一に、高い効率で逆転写反応を行うことができ、広いダイナミックレンジでの解析が可能となります。

実施例

1. gDNA RemoverによるゲノムDNA除去効果の確認

gDNA RemoverによるゲノムDNAの除去効果を確認するため、下記の条件にて逆転写反応を行い、続いてβ-ActinをターゲットにリアルタイムPCRを行いました。その結果、gDNA Remover処理(+)、逆転写(-)<下記③>の条件では増幅が見られないことから、確実にゲノムDNAが除去されていることが示されました。



 ●cDNA合成
試薬 : ReverTra Ace® qPCR RT Master Mix with gDNA Remover
鋳型 : 自家調製したHeLa total RNA 0.5μg /10μl反応系
条件 : gDNA Remover添加(+)、あるいは無添加(-)の4x DN Master Mixを用いてgDNA除去反応を
   行った後、それぞれをさらに、5x RT Master Mix IIあるいは5x RT Master Mix II no-RT
   Controlを用いて逆転写反応を実施。

●リアルタイムPCR
試薬 : THUNDERBIRD® SYBR® qPCR Mix (Code No.QPS-201)
鋳型 : 上記cDNA2μl/20μl反応系(持込量10%)   Target : ACTB(188bp)
測定 : Applied Biosystems 7900HT
 

2.同タイプ他社品とのゲノムDNA除去能の比較

HeLa total RNAに大過剰のヒトゲノムDNAを添加したモデル実験にて、同タイプ他社キットとのゲノムDNA除去能の比較を行いました。その結果、ReverTra Ace® qPCR RT Master Mix with gDNA Removerが最もゲノムDNA除去能に優れていることが示されました。


●cDNA合成
試薬 : ReverTra Ace® qPCR RT Master Mix with gDNA Remover(Code No.FSQ-301) および同タイプの
   他社キット2種
鋳型 : HeLa total RNA(0, 1pg, 10pg, 100pg, 1ng, 10ng, 100ng, 1μg)+ ヒトgDNA 100ng/20ul反応系
条件 : 各社キットの推奨条件に従って実施

●リアルタイムPCR
試薬 : THUNDERBIRD® SYBR® qPCR Mix(Code No.QPS-201)
鋳型 : 上記cDNA 2μl/20μl反応系(持込量10%)  Target : ACTB(188bp)
測定 : Applied Biosystems 7900HT
 

3.他社プレミックスcDNA合成試薬との逆転写反応効率(cDNA合成量)の比較

HeLa total RNA 100ngを鋳型に、各社キットの推奨条件にて逆転写反応を行い、続いてリアルタイムPCRにて5種類のターゲットの定量を行いました。その結果、本キットを用いることで最も高い収量が得られることが示されました。

●cDNA合成
試薬:ReverTra Ace® qPCR RT Master Mix(Code No.FSQ-201)及び他社の同タイプ(プレミックスタイプ)の製品
鋳型:HeLa total RNA 100ng /10μl反応系
条件:各社キットの推奨条件に従って実施

●リアルタイムPCR
試薬:THUNDERBIRD® SYBR® qPCR Mix(Code No.QPS-201)
鋳型:上記cDNA 2μl/20μl反応系(持込量10%)
Target:代表的な遺伝子5種
測定:Applied Biosystems 7900HT

参考文献

1)K.Miyazaki et al.,J.Bacteriology.,185:2219−2226(2003)
2)A.Nezu et al.,Biochem.J.,263:59−66(2002)
3)S.Nakashima et al.,J.Biochem.(Tokyo),131:241−246(2002)
4)S.Atsumi et al.,EMBO J.,20:5453−5460(2001)
5)Y.Yabuta et al.,Plant Cell Physiol.,41:666−675(2000)
6)S.Lee et al.,Gene,245:253−266(2000)
 

製品内容

【FSQ-201】
5x RT Master Mix           400μl×1本
5x RT Master Mix no-RT Control
                                      40μl×1本
Nuclease-free Water    1,000μl×2本
【FSQ-301】
gDNA Remover                  10μl×1本
4x DN Master Mix             440μl×1本
5x RT Master Mix II          400μl×1本
5x RT Master Mix II
no-RT Control [FSQ-30INC] 40μl×1本
Nuclease-free Waterr     1,000μl×2本

※10μlで反応を行なった場合、200回用としてご使用になれます。

注意事項

FSQ-201とFSQ-301に含まれる、5x RT Master Mix と 5x RT Master Mix II、および 5x RT Master Mix no-RT Control と 5x RT Master MixII no-RT Control は、それぞれ組成が異なりますので、必ず、本キット付属のパーツをご使用ください。

基本反応条件

【FSQ-201】
(RNAの変性)
RNAを65℃で5min.

氷上

(cDNA合成)
Nuclease-free Water  Xμl
5x RT Master Mix    2μl
RNA template  1pg~1μg
Total volume      10μl

37℃, 10min.
50℃,  5min.
98℃,  5min.
4℃,   hold.

【FSQ-301】
(RNAの変性)
RNAを65℃で5min.

氷上

(gDNA除去反応(DNase反応))
Nuclease-free Water  Xμl
4x DN Master Mix
(gDNA Remover 添加済み)  2μl
RNA template  0.5pg~0.5μg
Total volume  8μl

37℃, 5min.
(4℃)

(cDNA合成)
上記反応液  8μl
5x RT Master Mix II  2μl
Total volume  10μl

37℃, 15min.
98℃, 5min.
  4℃, hold.

ワンポイントアドバイス

● 反応時間延長の効果
tRNAなど、多量のRNAを完全に逆転写する場合には、反応時間を延長することで収量が向上することがありますが、通常は標準推奨条件の37℃15分で十分です。

●使用できる鋳型RNAの種類
Total RNA、mRNA、tRNA、rRNAなど、各種RNAを用いることが可能です。

● RNase H処理は不要
鋳型RNAの残存によってPCRが阻害されることがあるため、一般的には逆転写反応終了後にRNase Hによる鋳型RNAの分解反応を行いますが、本キットでは、弊社が開発した新システムにより鋳型RNAは逆転写反応後に非酵素的に除去されます(特許出願中)。逆転写反応後にRNase H処理を行う必要はありません。

 

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SYBR Green Realtime PCR Master Mix QPK-201 1ml×5本 ¥37,000 -20℃ 取扱説明書 SDS 該当無し
※1 法規制について
: 毒物及び劇物取締法に基づく医薬用外毒物です。
: 毒物及び劇物取締法に基づく医薬用外劇物です。
: 消防法に基づく危険物です。
: 御購入時に申込書の提出が必要な製品です。
: 「遺伝子組換え生物等の使用等の規制による生物の多様性の確保に関する法律」 (カルタヘナ法)に基づく組換え体または昆虫細胞組換え体で生産されたタンパク質です。
該当なし: 上記法令や申込書の提出に該当しない製品です。
製品サンプル請求一覧