SARS-CoV-2 Detection Kit -Multi-

本製品は、SARS-CoV-2 RNAのN遺伝子に由来する2領域および内部標準(インターナルコントロール)をマルチプレックスPCRで増幅可能な新型コロナウイルス(SARS-CoV-2)検出のためのリアルタイム1-step RT-PCRキットです。RNA精製作業は不要で、唾液や鼻咽頭ぬぐい液などの試料を前処理液と混合し熱処理したのち、リアルタイム1-step RT-PCR反応に供し、ウイルスRNAを検出します。

前処理液およびPCR反応組成を改良することで、試料由来の阻害物質耐性を向上し、試料の持ち込み可能量もアップしています。

本製品は、FAM、ROX、Cy5の3波長が測定可能なリアルタイムPCR装置でご使用になれます。本フィルターが搭載されていないリアルタイムPCR装置では、従来品の新型コロナウイルス検出キット SARS-CoV-2 Detection Kit –N1 set- / -N2 set- [Code No.NCV301/NCV302] をご使用ください。

●マルチプレックスPCRで増幅
SARS-CoV-2 RNAのN遺伝子に由来する2領域(N1,N2)をマルチプレックスPCRで増幅し、N1領域をCy5、N2領域をROX、内部標準をFAMチャネルで検出します。1チューブで2領域が検出できるため、試薬調製が容易になります。

●偽陰性のリスクを低減
内部標準を含むため、偽陰性のリスクを低減しています。

●試料の持ち込み量をアップ
弊社従来品[Code No.NCV301/NCV302]では、試料の持ち込み量が6μLでしたが、本製品では8μLの検体が添加可能になりました。

●迅速
試料から約60分で新型コロナウイルス(SARS-CoV-2)の検出が可能です。


●簡便
核酸を精製する必要はありません。試料(咽頭/鼻咽頭ぬぐい液、唾液、ウイルス培養液など)と前処理液を混合、熱処理をするだけで、PCRを行うことが可能です。

●キャリーオーバーコンタミネーションによる偽陽性のリスクを低減
酵素液にUracil-DNA Glycosylase(UNG)を含有しており、誤って混入した増幅産物を分解するため、キャリーオーバーコンタミネーションによる偽陽性を防止します。

1. 鼻咽頭ぬぐい液、唾液を用いた直接検出

「新型コロナウイルス(2019-nCoV)の遺伝子検査法の性能評価について」(国立感染症研究所 : https://www.niid.go.jp/niid/ja/diseases/ka/corona-virus/2019-ncov/ 9482-covid14-15.html)に従い、本製品を用いて検出を行った結果、以下の通りとなりました。

鼻咽頭ぬぐい液		感染研「病原体検出マニュアル2019-nCoV Ver.2.9.1」に従ったRT-PCR法
		陽性	陰性
本製品	陽性	10	0
	陰性	0	15

※陽性検体として、10~20コピーの検体を2検体、100～200コピーの検体を1検体および1,000～200,000コピーの検体7検体の計10検体を使用しました。
 

唾液		感染研「病原体検出マニュアル2019-nCoV Ver.2.9.1」に従ったRT-PCR法
		陽性	陰性
本製品	陽性	10	0
	陰性	0	15

※陽性検体として、10~20コピーの検体を2検体、100～200コピーの検体を1検体および1,000～200,000コピーの検体7検体の計10検体を使用しました。

◆ 京都大学大学院医学研究科 臨床病態検査学 京都大学医学部附属病院 検査部・感染制御部 松村 康史先生にご協力いただき、データを取得しました。→研究室のサイト 
 

2. 精製RNA(鼻咽頭ぬぐい液・唾液・喀痰)を用いた検出

「新型コロナウイルス(2019-nCoV)の遺伝子検査法の性能評価について」(国立感染症研究所 : https://www.niid.go.jp/niid/ja/diseases/ka/corona-virus/2019-ncov/ 9482-covid14-15.html)に従い、本製品を用いて検出を行った結果、以下の通りとなりました。

精製RNA (鼻咽頭ぬぐい液)		感染研「病原体検出マニュアル2019-nCoV Ver.2.9.1」に従ったRT-PCR法
		陽性	陰性
本製品	陽性	10	0
	陰性	0	15

※陽性検体として、10~20コピーの検体を2検体、100～200コピーの検体を2検体および1,000～200,000コピーの検体6検体の計10検体を使用しました。
 

精製RNA(唾液)		感染研「病原体検出マニュアル2019-nCoV Ver.2.9.1」に従ったRT-PCR法
		陽性	陰性
本製品	陽性	10	0
	陰性	0	15

※陽性検体として、10~20コピーの検体を2検体、100～200コピーの検体を1検体および1,000～200,000コピーの検体7検体の計10検体を使用しました。
 

精製RNA(喀痰)		感染研「病原体検出マニュアル2019-nCoV Ver.2.9.1」に従ったRT-PCR法
		陽性	陰性
本製品	陽性	10	0
	陰性	0	15

※陽性検体として、10~20コピーの検体を2検体、100～200コピーの検体を1検体および1,000～350,000コピーの検体7検体の計10検体を使用しました。
 

3. コントロールRNAを用いた増幅例

コントロールRNAを500コピー、50コピー、25コピーと希釈し、以下リアルタイムPCR装置を用いて検出を行いました。その結果、すべてのリアルタイムPCR装置において、N1セット、N2セットともに25コピー/反応が検出されました。

【コントロールRNA】
Twist Bioscience 「Twist Synthetic SARS-CoV-2 RNA Control 1 (MT007544.1) 」 [Code No. 102019]

【検証に用いたリアルタイムPCR装置】
<Roche> LightCycler®96,  LightCycler®480 Instrument II
<ABI>7500Fast, QuantStudio 5
<Bio-Rad> CFX96 Touch, CFX96 Touch Deep Well
<TaKaRa> Thermal Cycler Dice III ※Cy5フィルター搭載