Blunting high

本キットは、KOD DNA Polymeraseを用いたDNA末端の効率的な平滑化とそれに続くライゲーションを行うキットです。
DNA末端の平滑化に使用するKOD DNA Polymeraseは、超好熱始原菌Thermococcus属由来の耐熱性DNA Polymeraseであり、Polymerase活性と3'→5'Exonuclease活性を持ち、dNTPsの存在下で5'突出末端のfill in、3'突出末端のtrimを行うため、DNA末端を効率良く平滑化することができます。
また、Ligation highは1液タイプのライゲーション試薬であり、DNA溶液に混合するだけで、迅速に高効率のライゲーションが可能です。

●迅速

高いDNA合成能と強い3‘→5’ Exonuclease活性を持つKOD DNA Polymeraseを採用することで短時間の反応(2分)で、DNAの完全平滑化が可能です。

●簡便

キットにはプレミックスタイプのライゲーション試薬〈Ligation high〉が添付されています。平滑反応後、簡便な操作で、高効率な平滑末端ライゲーションが可能です。

ベクターの平滑化例

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EcoRⅠ(5'端突出)とSphⅠ(3'端突出)でDouble digestionしたpUC18 DNAをBlunting highで平滑化後、Ligationを行いました。その後、反応液を用いて大腸菌の形質転換を行い、生じたコロニーを計数しました。
その結果、突出末端を持つpUC18が、本キットによって効率的に平滑化されたことが分かりました。(未切断のpUC18により得られた形質転換効率を100%として計算しました)

1)Y. Katsuyama et al., Develop.　Biol., 213: 257-268(1999)

製品使用文献
1)T. Sato et al., Appl. Environ.　Microbiol., 71(7): 3889-3899. (2005)
2)N. Nakamura et al., Biol. Pharm. Bull., 28(3): 429-433. (2005)
3)H. Abea et al., FEMS Yeast Research, 4, (4-5): 417-425.(2006)