製品別FAQ

【THUNDERBIRD Next Probe qPCR Mix】

Q 従来品のTHUNDERBIRD qPCR Mix とは何が違うのですか?

以下のような違いがございます。

1. 組成を改良し、PCR効率を上げ、非特異反応(プライマーダイマー等の発生)を抑えることで、幅広い定量可能域(ダイナミックレンジ)を得ることが可能になっています。

2. 伸長時間10秒の高速サイクルにも対応しています。

3. プライマー・テンプレート混合後のPCR反応液の安定性が高いため、サンプル数が多く調製に時間がかかるような場合でも安定した結果が得られます。

4. dUTPを含むため、別売りのUracil-DNA Glycosylase(UNG),Heat-labile[Code No. UNG-101]を添加することで、キャリーオーバーコンタミネーションによる偽陽性を防止することができます。

5. 高い増幅効率・特異性を併せ持つため、PCR阻害物質存在下やマルチプレックスの検出系でも効率的な増幅が実施できます。

Q 冷蔵で保存できますか?

4℃で保存することも可能です。3ヶ月程度では品質に問題が生じないことを確認しています。長期間使用しない場合、-20°Cで再度凍結保存してください。

Q 凍結融解を繰り返しても大丈夫ですか?

10回程度の凍結融解では品質に全く問題が生じないことを確認しています。使用後は再凍結保存していただいても結構です。少量ずつ何度も使用する場合には、4℃で保存することも可能です。3ヶ月程度では品質に問題が生じないことを確認しています。長期間使用しない場合、-20°Cで再度凍結保存してください。

Q ROXを予め混ぜておくことはできますか?

可能です。混合後も同様に、遮光下で-20℃:1年間、2～8℃:3か月保存することができます。

Q 試薬にパッシブリファレンス色素は入っていますか?

含まれておりません。パッシブリファレンスを用いる機器では、各機種におけるROX添加量をご参照の上、別添のROXをご使用ください。補正を行わない機器では添加する必要はありません。

Q Uracil-DNA Glycosylase(UNG)は添付されていますか?

本製品には添付されておりません。別売りのUracil-DNA Glycosylase(UNG),Heat-labile[Code No. UNG-101]を使用してください。THUNDERBIRD Next Probe qPCR/UNG Set [Code No. QPX101/UNG101] も販売しております。

Q 逆転写反応液はどのくらいまで入れることができますか?

反応液量の10%を上限の目安としてください。ただし、リアルタイムPCRでの使用が考慮されていない一部の逆転写反応用試薬では、添加可能な量が10%より少なくなる場合があります。

当社リアルタイムPCR用cDNA合成キットReverTra Ace^® qPCR RT Kit [Code No. FSQ-101]、ReverTra Ace^® qPCR RT Master Mix [Code No. FSQ-201]、ReverTra Ace^® qPCR RT Master Mix with gDNA Remover [Code No. FSQ-301]は、リアルタイムPCRでの反応阻害を低減させる組成を採用しており、反応液量の20%まで添加が可能です。

Q プライマー、プローブの混合品を用いる場合、反応液はどのように調製すればいいですか?

反応液組成のうち、プライマー、プローブをその製品に置き換えて調製することになります。
20μL 反応系で、例えば、DNA溶液2μL、ROX reference dye 1×濃度が必要な機器を使用してqPCRを行う場合、以下のように調製します。

滅菌水	XμL
THUNDERBIRD Next Probe qPCR Mix	10μL
Primer,Probe混合品	Y*μL
50×ROX reference dye	0.4μL
DNA溶液	2μL

合計液量	20μL

　　
* Primer,Probe混合品の取扱説明書において、
　　　20μL反応の時に用いる液量

Q 従来品のTHUNDERBIRD qPCR Mix とサイクル条件を変える必要がありますか?

従来品とは設定を変える必要がありますので、説明書の条件に従ってください。特に変性時間が長いと、製品の特性が十分に発揮できなくなるケースがありますので、各機器の特性に応じて、1～5秒(最長5秒まで)に、最適な時間がわからない場合は、5秒に設定してください。

Q 測定できるターゲット長は従来品同様200 bpまででしょうか?

500bpまで測定可能です。

Q オプションのUNG反応を行う場合、失活はどのステップで行うのでしょうか。

Uracil-DNA Glycosylase(UNG),Heat-labile[Code No. UNG-101]を使用した場合、PCRの初期変性 95°C 20秒で十分失活します。

Q どのような機器に使用できますか?

以下の機器に対応しています。

メーカー	機種
Applied Biosystems	7000, 7300, 7500, 7500Fast, 7900, StepOne, StepOnePlus, ViiA7, QuantStudio 1, QuantStudio 3, QuantStudio 5, QuantStudio 6, QuantStudio 7Pro QuantStudio 12K
Agilent Technologies	Mx3000P, Mx3005P, AriaMx
Bio-Rad	CFX96 Touch, CFX96 Touch Deep Well, CFX96 Opus, CFX384, CFX Connect, MiniOpticon
Illumina	Eco-RealTime PCR System
Qiagen	RotorGene
Roche	LC2.0, LC96, LC480
Thermo Fisher	PikoReal96
Analytikjena	qTOWER3G
IT-IS Life Science	MyGo Mini
TaKaRa	DiceII, DiceIII, CronoSTAR