ホットスタート法対応・色素入り Taq Master Mix
Quick Taq® HS DyeMix
TOYOBO
価格表
用途
●PCR
説明
特長
●2×プレミックス(色素入り)
2×マスターミックスであり、プライマーを加えるだけで便利にご使用いただけます。色素(BPB)入りなので、PCR後にそのままゲルにアプライ可能です。
●優れたPCR性能
最適化されたバッファー組成および高純度のTaq DNA polymeraseの使用により、従来のTaq DNA polymeraseに比べPCR性能が向上しています。
●ホットスタートPCR対応
抗Taq DNA polymerase抗体によるホットスタート法を採用しており、高い感度と特異性を示します。
●高い保存安定性
凍結融解30回、4℃保存3ヶ月間において安定性を確認しています。
●コストパフォーマンス良好
安価な価格帯 (2.5mL:¥9,800 ー 50μLで反応を行った場合、100回使用可能) に設定されていることから、気軽に高効率なPCRを行うことができます。
実施例
1. コロニーダイレクトPCRを用いたインサートチェック
500bpのインサートを有するプラスミドpTA2で形質転換した大腸菌DH5αのコロニーをサンプルとして、ベクター上に設計したプライマーを用いてPCRを行いました。
その結果、インサートサイズに応じた明瞭なバンドを得ることができました。
本試薬は、コロニーダイレクトPCRにおいても、力を発揮することが分かりました。
2. ヒトp53遺伝子(2.9 kb)の増幅
ヒトゲノムDNA (50ng) を鋳型として、比較的増幅の難しいとされるヒトp53遺伝子(2.9kb)の増幅を実施しました。
その結果、Quick Taq® HS DyeMixを用いた場合、最も高効率、かつ特異性の高い結果を得ることができました。
また、ホットスタート法を用いなかった場合(レーン3.および4.)、特異性および感度の低下が見られることが分かりました(Quick Taq® HS DyeMixはHot start法に対応しています)。
3. さまざまな条件における増幅効率の比較
ヒトゲノムDNA (50ng)、及び大腸菌コロニーを鋳型として、ヒトβ-globin遺伝子(1.3kb, 3.6kb)、及びプラスミドインサート(3.9kb)の増幅を実施しました。
反応は、それぞれの試薬の至適条件に従って実施しました。
その結果、Quick Taq® HS DyeMixを用いた場合、高効率、かつ特異性の高い結果を得ることが可能でした。
その他の実施例
実施例4: 増幅産物を用いた直接制限酵素処理
参考文献
1) F. C. Lawyer et al., J. Biol. Chem., 264: 6427-6437(1989)
2) D. E. Kellogg, et al., BioTechniqus, 16: 1134(1994)
- 製品内容
Quick Taq® HS DyeMix 1.25mL×2本
※50μLで反応を行なった場合、100回用としてご使用になれます。
組成として以下を含みます。
rTaq DNA Polymerase
抗Taq 抗体
dNTPs
電気泳動用色素(BPB)
Reaction Buffer
- 基本反応条件
滅菌蒸留水 XμL
2×Quick Taq® HS DyeMix 25μL
10pmol /μL Primer F 1.0μL
10pmol /μL Primer R 1.0μL
Genomic DNA ~200ng
Plasmid DNA ~50ng
コロニー(※実施例ご参照)
Total 50μL
<2ステップサイクル>*
94℃ 2min.
↓
94℃ 30sec.
68℃ 1min./kb 25~40 cycles
<3ステップサイクル>*
94℃ 2min.
↓
94℃ 30sec.
(Tm-5)℃ 30sec.
68℃ 1min./kb 25~40 cycles
*プライマーのTm値が73℃未満の場合は、3ステップサイクルをお勧めします。
- ワンポイントアドバイス
※プライマーのTm値の計算は、最近接塩基対法(Nearest Neighbor method)を用いております。プライマーのTm値計算表(EXCEL)は、こちらからダウンロードいただけます。イノシンを含むプライマーのTm値はこの方法では計算できません。
FAQはこちら →
トラブルシューティングは
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English Page
- ※ 法規制について
- 毒: 毒物及び劇物取締法[医薬用外毒物]
- 国: 国民保護法[毒素]
- 劇: 毒物及び劇物取締法[医薬用外劇物]
- 組: カルタヘナ法(遺伝子組換え生物等の使用等の規制による
- 危: 消防法[危険物]
- 生物の多様性の確保に関する法律)
- P: PRTR法(化学物質排出把握管理促進法)[届け出義務物質]
- 申: ご購入時に申込書の提出が必要な製品
- 労: 労働安全衛生法[通知または表示義務物質]
- なし: 上記法令や申込書の提出に該当しない製品