Ligation high Ver.2

T4 DNA ligaseを主体とした高効率な1液タイプのライゲーション試薬です。さまざまな末端を持つDNA断片の連結反応に広く用いることができます。従来品に改良を加え、さらにさまざまな用途で簡便にお使いいただけるようになりました。
本品は、おなじみのLigation highを更に使いやすく改良した高効率な1液タイプのライゲーション試薬です。DNA断片と混合し、短時間反応させるだけで、高効率な連結反応を行うことができます。突出末端、平滑末端、及びTAクローニングに幅広く用いることができます。

●高効率

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特に、TAクローニングの効率が大幅にアップしました。下図は、各社キットとのTAクローニング効率の比較を示しています。

●-20℃保存で凍結しません

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フリーザーから取り出してすぐにご使用いただけます。右の写真は-20℃保存での試薬の状態を示しています。
[従来品:Ligation high〈緑〉、本製品:Ligation high Ver.2〈青〉]
 

●便利な1液タイプ

使い方は、従来品同様、DNA断片と混合するだけで簡単です。

1. DNA末端の形状とライゲーション効率との関係

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16℃反応における、DNA断片(0.5kb)のクローニング効率を末端形状別に比較しました。その結果、突出末端ライゲーションでは約5分でほぼライゲーション反応が完了していることが分かりました。また、平滑末端、及びTAクローニングにおいても30分で約70～80%の反応が完了することが分かりました。また、平滑末端クローニング、及びTAクローニングにおいては、1時間を越えて2時間まで徐々に効率が増加することも分かっており、クローニング効率が低い場合は、反応時間を2時間まで延長することにより、さらに効率を向上させることが可能です。
 

2.未精製PCR産物を用いるTAクローニング

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T ベクター(50 ng, 25 fmol)と、良好な増幅を示した未精製PCR産物(Taq DNA polymeraseで増幅した0.5kb断片)をさまざまな比率で混合したDNA溶液 7.5μL に、Ligation high Ver.2 7.5μLを添加し、16℃で30分間反応しました。その後、反応液10μLを用いてE. coli DH5αコンピテントセル 100μL を形質転換し、LB/Amp(XGal)プレートで培養後、コロニー数をカウントしました。その結果、なるべくPCR反応液の持ち込み量を少なくした方が良好な結果が得られることが分かりました。
また、精製したDNA断片を用いた方が高い効率が得られることが分かっており、効率が低い場合は、精製PCR産物を用いる方が良好な結果が期待できます。

1)R. L. Hawkins et al., Current Microbiol., 38: 335-341(1999)