Competent Quick DH5a

本製品は、短時間で高い形質転換効率が得られるように調製されたサブクローニンググレードの大腸菌DH5αコンピテントセルです。
従来のコンピテントセルでは、形質転換に1.5～2時間を要しましたが、本製品では、10分以下のプロトコールで確実に形質転換体を得ることができます。本プロトコールでは、アンピシリンの場合、SOC培地を用いたものに比べ約1/3～1/10(3×10⁷以上)の効率を得ることができます。カナマイシンの場合も約1/3～1/10程度です。しかし、カナマイシンに関しては、大腸菌が薬剤濃度に影響を受けやすいため、薬剤
濃度に注意が必要です。


遺伝子型
●DH5α
   deoR, supE44, hsdR17(rk-, mk+),
   phoA, recA1,endA1,gyrA96, thi-1,
   relA1, D(lacZYA-argF)U169,
   f80dlacZDM15, F^-, l^-
※DH5αは、dam⁺です。GATC部位の
アデニンはメチル化されます。

●簡便・迅速に形質転換可能

約10分間で形質転換が完了します。
pBR322を用いて形質転換を行い、アンピシリンにてセレクションした場合、≧3x10⁷ transformants /μg・pBR322の効率が得られます。

●保存安定性良好

-80℃で少なくとも3ヶ月は安定です。さらに長期間保存される場合には液体窒素中での保存をお勧めします。

●高いコストパフォーマンス

20本入りです。

1. さまざまな抗生物質を使用した場合における形質転換効率

pBR322(Ampicillin^r , Tetracycline^r)、pAK119M(Kanamycin^r)、pAT5(Chloramphenicol^r)の各プラスミド 10pg / 5μL TE buffer を用いて基本反応条件で形質転換を行い、各抗生物質でセレクションした場合の形質転換効率の評価を行いました。また、同時に、本プロトコールに SOC 培地での培養ステップ(37℃、30 分間あるいは 60 分間)を追加したプロトコールでも評価を行いました。その結果、アンピシリン及びカナマイシンでセレクションした場合には、わずか 10 分間の本プロトコールで 10⁸ transformants /μg・plasmid 以上の効率が得られました。一方、テトラサイクリン及びクロラムフェニコールでセレクションした場合では、ヒートショック後に SOC 培地での培養ステップを追加することにより、10⁸以上の効率が得られることが分かりました。

なお、本実験では、LB 寒天培地の各抗生物質は下記の濃度にて実施しました。
・アンピシリン(Amp):50μg/mL
・カナマイシン(Kan):10μg/mL
・テトラサイクリン(Tet):20μg/mL
・クロラムフェニコール(Cm):100μg/mL
 

2. プラスミドDNAの液量の形質転換効率への影響

pBR322(Ampicillin^r)5pg / 5～50μL TE buffer を用いて基本反応条件で形質転換を行い、各液量での形質転換効率の評価を行いました。その結果、形質転換に供するプラスミドDNA の液量が、コンピテントセル容量の 30%を超えると、効率が低下傾向にあることが分かりました。

 

3. プラスミドDNA量の形質転換効率への影響

pBR322(Ampicillin^r) 1pg～100ng / 5μL TE buffer を用いて基本反応条件で形質転換を行い、各 DNA 量での形質転換効率の評価を行いました。その結果、形質転換に供するプラスミド DNA量が、コンピテントセル100μLに対し10ngを超えると、効率が低下傾向にあることが分かりました。 

1)M. Mandel and Higa, A., J. Mol.Biol., 53: 159-162(1970)
2)M. Dagert and S. D. Ehrlich, Gene, 6: 23-28(1974)
3)S. R. Kushner, in Genetic Engineering(H. W. Boyer, and S. Nicosia, Eds.),17-23, Elsevier/North Holland, Amsterdam(1978)
4)D. Hanahan, J. Mol. Biol., 166:557-580(1983)
5)H. Inoue, H. Nojima and H.Okayama, Gene, 96: 23-28(1990)