スタンダードDNAポリメラーゼ
rTaq DNA Polymerase
TOYOBO
価格表
Mg別添タイプ
Mg含有タイプ
用途
●PCR
説明
本酵素はThermus aquaticus YT-1よりクローニングされたTaq DNA polymeraseの遺伝子を大腸菌を用いて組換え発現させ調製したものであり、天然のものと同じ性質を示します。
高純度化しているため、特異性に優れています。
特長
●2タイプから選択可能
実験の目的に合わせて、反応バッファーをMg別添タイプとMg含有タイプから選択可能です。
実施例
ゲノムDNAを用いたPCR例
HumanゲノムDNA(50ng)を鋳型として、Primer 20pmoles、酵素1.25Uの条件を用い、50μlの反応系で増幅を行いました。Mg2+とdNTPsの終濃度は、それぞれ1.5mMと0.2mMとし、アニーリング温度を55℃としました。その結果、180bpから1.3kbまでのターゲットを効率良く増幅することができました。
参考文献
1)F. C. Lawyer et al., J. Biol. Chem., 264: 6427-6437(1989)
2)T. Nagahama et al., Stem cells, 19: 425-435(2001)
- 製品内容
rTaq DNA Polymerase(5U/μL) 50μL×1本
10×Buffer[TAP-2B(Mg別添タイプ)
/TAP-2M(Mg含有タイプ)] 1mL×1本
25mM MgCl2(Mg別添タイプのみ) [TAP-2S]
1mL×1本
2mM dNTPs[NTP-201] 1mL×1本
形状:
20mM Tris-HCl(pH8.0)
100mM KCl
0.1mM EDTA
1mM DTT
0.5% Nonidet® P-40
0.5% Tween® 20
50% Glycerol
10×Buffer組成:
〈Mg別添タイプ〉[Code No. TAP-2B]
100mM Tris-HCl(pH8.3)
500mM KCl
〈Mg含有タイプ〉[Code No. TAP-2M]
100mM Tris-HCl(pH8.3)
500mM KCl
15mM MgCl2
活性の定義:
75℃において、30分に10nmolの全ヌクレオチドを酸不溶性画分に取り込む酵素量を1Uとします。
起源:
E.coli 組換体
- 注意事項
PCRには製品に添付されているdNTPsまたは別売りのdNTPs Mixture (2mM) [NTP-201]をご使用ください。他のdNTPsでは、十分な性能が得られない場合があります。
- 基本反応条件
-
滅菌蒸留水 XμL
10×Buffer 5μL
25mM MgCl2 3μL(1.5mM)
各Primer 5～50pmoles each
2mM dNTPs 5μL(0.2mM)
Taq(5U/μL)0.25～0.5μL(1.25～2.5U)
鋳型 1～50ng(Plasmid)
10～1000ng(Genomic DNA)
～1μL(逆転写反応液)
Total 50μL
- ワンポイントアドバイス
-
●ホットスタートPCR
抗Taq DNA polymerase抗体「anti-Taq high」を混合して用いることでホットスタートPCRが可能です。
●PCR産物のクローニング
本酵素によるPCR産物は、TAクローニング法によってクローニングできます。高効率TAクローニングキット「TArget CloneTM」などをご使用いただけます。本酵素は校正活性を示さないため、正確性はあまり良くありません。
●PCR条件の設定について
伸長反応は、ターゲット1kbに対して1min.を標準とします。アニーリング温度は、Tm値から5-10℃低めに設定します。もしバンドが認められない場合には更にアニーリング温度を下げる、もしくはマグネシウム濃度を上げて検討します。エキストラバンドが生じたときにはアニーリング温度を高めに設定する、もしくはマグネシウム濃度を下げることをお勧めします。
※プライマーのTm値の計算は、最近接塩基対法(Nearest Neighbor method)を用いております。プライマーのTm値計算表(EXCEL)は、こちらからダウンロードいただけます。イノシンを含むプライマーのTm値はこの方法では計算できません。
English Page
- ※ 法規制について
- 毒： 毒物及び劇物取締法[医薬用外毒物]
- 国： 国民保護法[毒素]
- 劇： 毒物及び劇物取締法[医薬用外劇物]
- 組： カルタヘナ法(遺伝子組換え生物等の使用等の規制による
- 危： 消防法[危険物]
- 生物の多様性の確保に関する法律）
- Ｐ： PRTR法（化学物質排出把握管理促進法）[届け出義務物質]
- 申： ご購入時に申込書の提出が必要な製品
- 労： 労働安全衛生法[通知または表示義務物質]
- なし： 上記法令や申込書の提出に該当しない製品
