KODシリーズで増幅された平滑末端PCR産物をそのままクローニング可能です。

高効率TAクローニングキット TArget Clone™/ TArget Clone™ -Plus-

価格表

TArget Clone™

Code No. 包装 価格 保存温度 取扱説明書
データシート
SDS 法規制※1
TAK-101 10回用 ¥12,000 -20℃ 取扱説明書 該当無し

TArget Clone™ -Plus-

Code No. 包装 価格 保存温度 取扱説明書
データシート
SDS 法規制※1
TAK-201 10回用 ¥16,000 -20℃ 取扱説明書 該当無し

10×A-attachment Mix

Code No. 包装 価格 保存温度 取扱説明書
データシート
SDS 法規制※1
TAK-301 25μl(25回用) ¥12,000 -20℃ 取扱説明書 該当無し

用途

●通常のTAクローニング 「TArget CloneTM
●KODシリーズ由来の平滑末端産物のTAクローニング 「TArget CloneTM -Plus-」
●KODシリーズ由来の平滑末端へのdA付加 「10×A-attachment Mix 」

 

説明

高効率なTAクローニングキットです。Taq系酵素で増幅されたPCR産物に加え、KODシリーズで増幅された平滑末端PCR産物も直接TAクローニングすることが可能です。TaqやTth DNA polymerase、Blend Taq®、KOD Dashなどの増幅産物は3'末端にアデニンを付加されたものが多く、直接Tベクターに連結することができます(→TArget CloneTM使用)。
一方、KODシリーズ(KOD DNA Polymerase、KOD -Plus-シリーズ、及びKOD FXシリーズ)のPCR産物の3'末端のほとんどは平滑化されているため、PCR産物をそのまま用いてTAクローニングすることはできません。そのような増幅産物をTAクローニングできるようにするために、TArget CloneTM -Plus-では、10×A-attachment Mixを用いて平滑末端に塩基(主にアデニン)を付加する反応を加えています。
10×A-attachment Mixには、末端に塩基を付加するためのTaq DNA polymeraseと反応後に残留しているKODの3'→5'Exonuclease活性(校正活性)を中和するための抗KOD抗体が含まれています。
 

特長

●迅速・高効率
ライゲーション反応は最短5分で完了します。

●確実
LacZを用いたカラーセレクションが可能です。

●便利
マルチクローニングサイトの両端に転写用のプロモーター(T7、T3)を有しており、転写産物の調製に用いることができます。

●平滑末端PCR産物にも対応 「TArget CloneTM -Plus-」[TAK-201]
KOD、KOD -Plus-シリーズ、及びKOD FXシリーズのPCR産物を直接使用してTAクローニングを行うことができます。PCR産物を10×A-attachment Mix(Code. TAK-301)と混合し、10分間反応させるだけでdA付加が完了。


 

実施例

様々なPCR産物を用いたTAクローニング効率の検討

様々なPCR産物を用いたTAクローニング効率の検討

高正確性酵素:KOD -Plus-、KOD -Plus- Ver.2、及びBlend Taq®を用いて、human genomeよりβ-globin遺伝子0.5kbをPCR増幅しました。その後、PCRプロダクトを精製なしでTArget CloneTM、及びTArget CloneTM -Plus-を用いて、TA2 VectorにTAクローニングを行いました。その結果、KOD -Plus-及びKOD -Plus- Ver.2を用いた場合、TArget CloneTM -Plus-を用いることにより、格段にクローニング効率が向上することが分かりました。一方Blend Taq®ではTArget CloneTM -Plus-と比べると、若干効率は低下しますが、TArget CloneTMを用いても問題なく高効率にTAクローニングできることが分かりました。
 

参考文献

1) H. Mizuguchi et al., J. Biochem. (Tokyo), 126: 762-768 (1999)

製品使用文献
1) F. Ge et al., Journal of Biochemistry, 143(5): 603-609. (2008)
 

製品内容

【TAK-101】
pTA2 Vector(50ng/μl) 10μl
2×Ligation Buffer 50μl
T4 DNA Ligase 10μl

【TAK-201】
pTA2 Vector(50ng/μl) 10μl
2×Ligation Buffer 50μl
T4 DNA Ligase 10μl
10×A-attachment Mix 10μl [TAK-301]

【TAK-301】
10×A-attachment Mix 25μl (25回用)
 

基本反応条件

「TArget CloneTM
滅菌蒸留水(3-X)μl
2×Ligation Buffer 5μl
pTA2 Vector (50ng/μl) 1μl
PCR産物Xμl
T4 DNA Ligase 1μl
Total Volume 10μl
室温(15~25℃)、30min.

「TArget CloneTM -Plus-」
PCR産物from KOD 9μl
10×A-attachment Mix 1μl
Total Volume 10μl
60℃、10min.

滅菌蒸留水(3-X)μl
2×Ligation Buffer 5μl
pTA2 Vector (50ng/μl) 1μl
上記処理済PCR産物Xμl
T4 DNA Ligase 1μl
Total Volume 10μl
室温(15~25℃)、30min.

「10×A-attachment Mix」
PCR産物from KOD 9μl
10×A-attachment Mix 1μl
Total Volume 10μl
60℃、10min.

上記処理済PCR産物
任意のTベクター
ライゲーション試薬
室温(15~25℃)、30min.
 

ワンポイントアドバイス

精製PCR産物を用いた場合のA-attachment Mixの使用法について
PCR後にエキストラバンドが生じている場合は、PCR産物を精製してから用います。その場合、A-attachment Mixに加え、dNTP、MgCl2 、PCR Bufferを1×濃度になるように加えて反応します。
 

関連商品

(別売りパーツ)

品名 Code No. 包装 価格 保存温度 取扱説明書
データシート
SDS 法規制※1
10×A-attachment Mix TAK-301 25μl(25回用) ¥12,000 -20℃ 取扱説明書 該当無し

TArget Clone™に対応するPCR酵素

品名 Code No. 包装 価格 保存温度 取扱説明書
データシート
SDS 法規制※1
rTaq DNA Polymerase Mg別添タイプ TAP-201 250U×1本 ¥9,500 -20℃ データシート 該当無し
rTaq DNA Polymerase Mg含有タイプ TAP-211 250U×1本 ¥9,500 -20℃ データシート 該当無し
rTth DNA Polymerase TTH-301 250U×1本 ¥15,000 -20℃ データシート SDS 該当無し
Blend Taq BTQ-101 250U×1本 ¥19,000 -20℃ 取扱説明書 データシート SDS 該当無し
Blend Taq -Plus- BTQ-201 250U×1本 ¥21,000 -20℃ 取扱説明書 データシート SDS 該当無し
KOD Dash LDP-101 250U×1本 ¥25,000 -20℃ 取扱説明書 データシート 該当無し

TArget Clone™ -Plus- に対応するPCR酵素

品名 Code No. 包装 価格 保存温度 取扱説明書
データシート
SDS 法規制※1
KOD DNA Polymerase KOD-101 250U×1本 ¥28,000 -20℃ 取扱説明書 データシート SDS 該当無し
KOD -Plus- KOD-201 200U×1本 ¥30,000 -20℃ 取扱説明書 データシート SDS 該当無し
KOD -Plus- Ver.2 KOD-211 200U×1本 ¥30,000 -20℃ 取扱説明書 データシート SDS 該当無し
KOD -Plus- Neo KOD-401 200U×1本 ¥30,000 -20℃ 取扱説明書 SDS 該当無し
KOD FX KFX-101 200U×1本(200回用) ¥35,000 -20℃ 取扱説明書 SDS 該当無し
KOD FX Neo KFX-201 200U×1本(200回用) ¥35,000 -20℃ 取扱説明書 SDS 該当無し
※1 法規制について
: 毒物及び劇物取締法に基づく医薬用外毒物です。
: 毒物及び劇物取締法に基づく医薬用外劇物です。
: 消防法に基づく危険物です。
: 御購入時に申込書の提出が必要な製品です。
: 「遺伝子組換え生物等の使用等の規制による生物の多様性の確保に関する法律」 (カルタヘナ法)に基づく組換え体または昆虫細胞組換え体で生産されたタンパク質です。
該当なし: 上記法令や申込書の提出に該当しない製品です。