コーヒーブレイク
限界に挑戦 ! 伸長時間1秒でどのくらい増幅できるかやってみた
■はじめに
KOD One® PCR Master Mixは高速PCRができる製品ですが、1秒でどこまで増幅できるのか?
製品性能ぎりぎりの限界に挑戦した結果をご紹介します。
■実験方法
KOD One® PCR Master Mixで、伸長時間を1秒とし、1kb、2.5kb、5kb、10kbのターゲットの増幅を試みました。
滅菌蒸留水 10μL
2×Master Mix 12.5μL
10μM Forward Primer 0.75μL
10μM Reverse Primer 0.75μL
25ng/μL ヒトゲノムDNA 1μL
Total Volume 25μL
98℃, 10秒
60℃, 5秒
68℃, 1秒 ×30 cycles
■結果
KOD One® PCR Master Mixは1秒で5kbまで増幅できました !
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30秒/kbの試薬と比較すると、なんと60分以上の短縮!!!
(結果が出るのが早すぎて、1日に頼まれるサンプル数が増えたという研究員からの嬉しい悲鳴が…)
■さいごに
鋳型量や配列によって1kbで増幅可能な増幅鎖は異なりますので、あくまでも参考としてお楽しみください。
KOD One® PCR Master Mixの推奨時間はこちら
| 増幅長 | 伸長時間 |
| ～1kb | 1秒 |
| 1～10kb | 5秒/kb |
| 10kb～ | 10秒/kb |
今回使用した製品はこちら
KOD One® PCR Master Mixシリーズ
高い正確性・増幅効率をもつ改変型KOD DNA polymeraseを用いたPCR用2×マスターミックスです。
優れた正確性と簡便さを持ち、高速PCRが可能です。
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