製品別FAQ
【SuperPrep Cell Lysis & RT Kit for qPCR】
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Q どのような細胞で使用できますか?
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A
下表の代表的な哺乳類株化細胞といくつかの初代細胞について適用できることを確認しています。
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Q 逆転写プレミックス試薬(5×RT Master Mix)にはプライマーは入っていますか?
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A
Oligo dTとランダムプライマーが最適比率で入っています。高効率で逆転写反応を行なうことができます。
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Q gDNA RemoverとLysis Solutionの混合液の保存は可能ですか?
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A
gDNA RemoverとLysis Solutionの混合液は各ウェルに添加する直前に調製し、gDNA Removerを添加したLysis Solutionの保存は避けてください。
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Q RNase Inhibitor が先になくなったのですが、単品販売はありますか?
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A
RNase Inhibitor [Code No. SIN-201] の単品販売はございますが、SuperPrep は Kit で使用された場合に性能が保証されている製品ですので、別売りの単品を組み合わせて使用された場合は、定量性の保証ができなくなり、お勧めしておりません。
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Q 細胞溶解から逆転写反応の終了までどのくらい時間がかかりますか?
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A
細胞溶解に7分、逆転写反応に25分で、約30分かかります。(操作時間は含まれません。)
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Q 調製したライセートは氷上でどのくらい保存できますか?
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A
細胞の種類によってはRNaseの活性が強く、処理後もRNase活性が残存する可能性がありますので、
速やかに逆転写(RT)反応を行い、cDNA化することをお勧めいたします。一時中断される場合は以下を目安に逆転写反応を行ってください。
SuperPrep Cell Lysis & RT Kit for qPCR 2時間以内
SuperPrep II Cell Lysis & RT Kit for qPCR 6時間以内 -
Q 調製したライセートは逆転写反応にどのくらいの量まで使用できますか?
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A
20～40μL反応系にライセートを20%容量(40μLの場合、ライセート8μL)添加することをお勧めいたします。
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Q 合成したcDNAはqPCR反応にどのくらいの量まで使用できますか?
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A
合成したcDNAはqPCR反応系の10～15%容量を目安にご使用ください。化学修飾系ホットスタートqPCR試薬をご使用の場合、本製品の逆転写反応液の持込を最大10%を目安としてご使用ください。 使用するqPCR試薬の性質によっては、この値は低下する可能性があります。逆転写反応液の添加量を減らしてご確認ください。
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Q 植物細胞・動物組織・微生物からcDNAを合成できますか?
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A
本品は哺乳類培養細胞用に開発されたキットです。植物や微生物、または動物組織などへは適用できません。
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Q 細胞数とRNA量の関係は?
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A
106個の一般的な接着細胞から約10μgのトータルRNAが精製できます。
10個の細胞には約0.1ngのトータルRNAが含まれる計算です。ただし、細胞によって大きく変動する可能があります。 -
Q どのくらいの細胞数のサンプルが使用できますか?
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A
96ウェルプレート1ウェルで一般に1×101～7×104 cellsの細胞サンプルを処理することが可能ですが、細胞の種類によって多少異なります。104 cellsを目安としていただくか、予備実験で上限を確認いただくことをお勧めいたします。
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Q SuperPrep II Cell Lysis & RT Kit for qPCR では、なぜ Stop Solutionを添加する必要がなくなったのですか?
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A
細胞溶解を行った後に、Stop Solutionに懸濁したRNase Inhibitorを加える手順を、最初からRNase Inhibitorを入れておくプロトコールに変更したためです。
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Q 従来品 [SCQ-101] とSuperPrepII Cell Lysis & RT Kit for qPCR [SCQ-401] のRT-Reagentsは互換性がありますか?
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A
逆転写反応は起こりますが、同じパーツではありませんので、専用の RT Reagents を使用されることをお勧めいたします。
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Q cDNA合成がうまくいかない場合の原因と対応方法を教えてください。
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A
トラブルシューティングをご覧いただき、解決しない場合はお問い合わせください。
SuperPrep® Cell Lysis & RT Kit for qPCR トラブルシューティング
SuperPrep®II Cell Lysis & RT Kit for qPCR トラブルシューティング
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