遺伝子検査用原料 TTx DNA Polymerase

TTx DNA Polymeraseは、Mn²⁺存在下で逆転写活性を⽰すユニークなPCR酵素です。⾼い増幅活性と5ʼ→3ʼ Exonuclease活性を有するため、TaqMan^®アッセイなどのプローブを用いたリアルタイムPCR、RT-PCRにご使用になれます。またTTx DNA Polymerase は、汎用酵素であるTaq DNA Polymerase と⽐べ増幅効率が⾼く、⾼速サイクルでの反応やPCR阻害物質を含むクルードサンプルからの増幅が可能です。

酵素反応用bufferについて
Code No. QRZ-1B1 : dNTPs(A, C, G, U)、Mgを含みます。
Code No. QRT-1B1, QRT-2BS, QRT-3BS : dNTP や金属イオンは含まれておりません。

酵素単品、バッファー・試薬との組み合わせ、包装サイズなどカスタマイズ対応が可能です。詳細はお問い合わせください。

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● Mg²⁺使用で高効率なDNA増幅が可能
 TTx DNA Polymeraseは汎用酵素であるTaq DNA PolymeraseやTth DNA Polymeraseに比べ伸長性が高く、効率的な増幅が可能です。

● Mn²⁺使用で高効率な1酵素系・1-step RT-PCRが可能
 TTx DNA Polymeraseは高い逆転写活性を持ち、微量の鋳型からでも効率よくRT-PCRを行うことができます。
 DNA・RNAどちらからでも高い増幅効率で増幅が可能です。60°Cにおいて逆転写が可能なため、GCリッチな配列や高次構造をとりやすいRNAの増幅に適しています。

● 高速サイクルで検出可能
TTx DNA Polymeraseは増幅効率が高いため、短時間の反応サイクルでも効率的な増幅が可能です。

● クルードサンプルに強い
PCR阻害物質を含むクルードなサンプル(生体試料、土壌、食品など)からの増幅に優れます。核酸精製なしで増幅が可能です。

● 高速ホットスタート [Code No. HSTTX-129, HSTTX-219]
抗DNAポリメラーゼ抗体を用いたホットスタートシステムを採用しています。抗体を用いたホットスタートは非特異反応の抑制に強力な効果を示し、また、加熱によって速やかに抗体が失活するため、酵素の再活性化も迅速であり、酵素への高温によるダメージを最小限に抑えることができます。

● 凍結乾燥試薬が調製可能 [Code No. HSTTX-219, QRT-2BS, QRT-3BS]
凍結乾燥を妨げるGlycerolを含まないため、凍結乾燥用試薬の原料として利用できます。

1.調製した試薬の凍結乾燥による影響

Hot Start TTx DNA Polymerase<Glycerol Free> [Code No. HSTTX-219] および10×Buffer for rTth/TTx (DNA/RNA) <Glycerol Free> [Code No. QRT-2BS]、2.5×Buffer for rTth/TTx (DNA/RNA) <Glycerol Free>Stabilizer plus [Code No. QRT-3BS] を用いてqPCR Mixを調製し、凍結乾燥前後の試薬を用いて、6250, 1563, 391, 98, 24コピーの
SARS-CoV-2 RNAの検出を行いました。

その結果、下方の図のようにいずれも良好な増幅が得られ、凍結乾燥による影響がないことがわかりました。

2.血漿を含むサンプルからの増幅

(1) 血漿を含むサンプルを用いたPCRによる検出

Hot Start TTx DNA Polymerase<Glycerol Free> [Code No. HSTTX-219]、2.5×Buffer for rTth/TTx (DNA/RNA)<Glycerol Free>Stabilizer plus [Code No. QRT-3BS] およびTaq DNA PolymeraseをベースとしたリアルタイムPCR試薬を用い、TaqMan^®プローブによるアフリカ豚コレラウイルス(ASFV)のDNA(10⁶, 10⁵, 10⁴, 10³, 10², 10¹コピー)の検出をそれぞれ推奨の反応サイクルにて実施しました。 

各20μLの反応液に対し2.5μLの血漿を添加し反応を⽐較した結果、Taq DNA PolymeraseをベースとしたリアルタイムPCR試薬では血漿の阻害を受け、増幅が確認されないところ、本試薬では、血漿の阻害を受けることなく増幅が可能でした。



(2) 血漿を含むサンプルを用いたRT-PCRによる検出

Hot Start TTx DNA Polymerase<Glycerol Free>[HSTTX-219]、2.5×Buffer for rTth/TTx (DNA/RNA)<Glycerol Free>Stabilizer plus[QRT-3BS]、RNase Inhibitor[SIN-201]を用い、TaqMan^®プローブによるSARS-CoV-2のRNA(6250, 1563, 391, 98, 24コピー)の検出を高速サイクルにて実施しました。

各20μLの反応液に対し1.5μLの血漿添加あり/なしで反応を⽐較した結果、本試薬では高速サイクルを用いても効率的な増幅が可能であり、血漿の影響を受けていないことがわかりました。

90℃	30sec.
65℃	5min.
95℃	1min.
↓
95℃	3sec.	×45
65℃	10sec.
※赤字部分は通常よりも 高速で行っています。