Calf Intestine Alkaline Phosphatase

本酵素は、分子量100,000、等電点(PI)=5.7、至適pH10.0～10.5であり、DNA及びRNAのリン酸モノエステル結合を加水分解する活性を有します。
ジリン酸エステル結合やトリリン酸結合には作用しませんが、ATP等のピロリン酸結合にも弱い加水分解作用を示します。阻害剤としてはCu²⁺、Ag⁺、Hg²⁺、及びEDTAなどが知られています。
本酵素は、ライゲーション反応にDNA断片の5‘末端のリン酸基が必要であることを利用し、制限酵素処理したベクターを脱リン酸化処理することによるセルフライゲーションの防止などに用いられます。
また、5‘末端標識プローブを作製するときに、あらかじめプローブの5’端のリン酸基を除去することによる、Kinaseと[γ-³²P]ATPを用いる標識の効率の向上などにも用いられます。

●簡便

65℃、30min.の熱処理で失活させることができます。

BAPとCIAPの熱安定の違い

拡大する＋

BAPとCIAPの熱安定性を比較しました。
BAPはCIAPに比べて非常に熱安定性が高いことが分かりました。よって、BAP処理DNAサンプルをLigation反応に使用する場合には必ずフェノール処理などの精製が必要であることが示唆されました。
一方、CIAPは65℃、30分間の熱処理でほとんど失活させることができました。

1)H. N. Ferunley, The Enzymes (3rd Ed.), 4: 417-447(1971)
2)R. K. Morton, Biochem. J., 61: 232-240(1955)
3)F. Dray et al., Methods of Enzymatic Analysis, 9: 348-362(1986)
4)P. Rathman and B. B. Saxtena, Methods of Enzymatic Analysis,9: 396-404(1986)