よくある質問

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PCR/RT-PCRのご質問【KOD FX Neo】

KOD FX との違いは何ですか?開 く閉じる

酵素溶液に伸長エンハンサーが添加されており、増幅効率・伸長性が改善されております。また、

伸長反応の時間もクルードサンプルではない場合は、1 min./kb から 30 sec./kb に短縮されております。
 

正確性はどのくらいですか?開 く閉じる

測定条件にもよりますが、KOD FX同様、Taq DNA Polymeraseに対して、約10倍高いというデータ

がございます。 
 

KOD FX Neoは最大どれ位の長さまで増幅可能ですか?開 く閉じる

ヒトゲノムDNAを鋳型に40kbの増幅を確認しています。

 

長鎖ターゲットを増幅する際のコツはありますか?開 く閉じる

>10 kbのターゲットの増幅には、長め(27mer以上)にプライマーを設計し、アニーリング(及び伸長反応)

を比較的高い温度に設定します。特に、ステップダウンサイクル*での増幅が有効です。また、精製度の

低いプライマーではなく、カートリッジ精製、もしくはHPLC精製グレードのプライマーのご使用をお勧め

します。

 

プライマーのTm値の計算はどのように行えば良いですか?開 く閉じる

最近接塩基対法(Nearest Neighbor method)を用いております。プライマーのTm値計算表(EXCEL)は、

こちらからダウンロードいただけます。

 

増幅産物の精製はどういった方法で行えば良いですか?開 く閉じる

フェノール/クロロホルム処理を行った後、エタノール沈殿を行うか、弊社の磁性ビーズを利用したDNA

精製キット「MagExtractor TM -PCR & Gel Clean up-(Code No. NPK-601)」を利用すると便利です。

 

増幅産物をそのまま制限酵素で処理して、クローニングできますか?開 く閉じる

増幅産物をクローニングに用いる場合は、制限酵素処理前に増幅産物の精製を行ってください。

DNA Polymeraseが残存している場合、本酵素の持つ3’→5’ Exonuclease活性により制限酵素処理中

に突出末端が削られる可能性があります。

 

PCR産物のTAクローニングは可能ですか?開 く閉じる

専用TAクローニングキット「TArget CloneTM -Plus-(Code No. TAK-201) 」をお薦めいたします。

このキットを用いると精製なしでPCR産物を高効率でTAクローニングすることができます。