実施例

CATAROSEV 実施例4 トマト果実からの細胞外小胞の回収例

【試料】生トマト
・トマトを絞り、不織布フィルター濾過後、1,000g×10分遠心-上澄み回収、3,000g×10分遠心-上澄み回収、 10,000g×10分遠心-上澄み回収
・0.45μm、0.22μmメンブレンフィルターでろ過(電気伝導度 5.8mS/cm)
・0.05M or 0.1M or 0.2M NaCl 10mM Tris-HClを用いて、電気伝導度を① 6.6mS/cm、② 9.5mS/cm、③ 14.0mS/cmに調整

【精製プロトコル】
・膜の平衡化 : 0.10M NaCl 10mM Tris-HCl×5mLを通液
・試料の膜への吸着 : 塩濃度調整後の試料を各18mL通液
・洗浄 : 0.1M NaCl 10mM Tris-HCl×10mLを通液
・回収0.2M溶出 :  0.2M NaCl 10mM Tris-HCl×6mLを通液、回収
・回収0.5M溶出 :「回収0.2M溶出」を実施した後に0.5M NaCl 10mM Tris-HCl×6mLを通液、回収

【回収サンプル/NTA測定結果】


【考察】
植物由来の細胞外小胞は比較的粒子が大きいことが知られています。
回収量が少ない場合は、0.5M NaClなど、推奨(0.3M)より高めの塩濃度のBufferで溶出を検討ください。


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