PVDF Blocking Reagent for Can Get Signal^®

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PVDF Blocking Reagent for Can Get Signal^®は、免疫反応促進試薬「Can Get Signal^®」を用いるウェスタンブロット解析に適した、Ready to useのブロッキング試薬です。
本試薬は、ウェスタンブロット解析において多用されるPVDFなどのメンブレンに対する親和性が向上しており、高いブロッキング性能を発揮します。また本試薬は、人工合成ポリマーを主成分とし、タンパク性の成分を含まず、リン酸化タンパク質等の検出に適しています。Can Get Signal^® Immunoreaction Enhancer Solutionと組み合わせてご使用ください。

●高いブロッキング性能

本試薬は、PVDF膜を用いるウェスタンブロット解析での使用に至適化されており、高いブロッキング性能を発揮します。免疫反応促進試薬Can Get Signal^® Immunoreaction Enhancer Solutionを用いるウェスタンブロット解析に適しています。
 

●プロテインフリー

本試薬は合成ポリマーであり、タンパク質性の成分を含有しないため、リン酸化タンパク質の検出などに最適です。
 

●マスキング効果を低減

本試薬は、スキムミルク・ゼラチン等のブロッキング剤使用時に問題となる、抗原のマスキングによるシグナル低下が少なく、高いS/N比を得ることができます。
 

1.各種ブロッキング剤との性能比較

ブロッキング剤として、本ブロッキング試薬、5%スキムミルク/TBS-T、5%BSA/TBS-T、およびA社製液状ブロッキング試薬を用いて、HeLa細胞溶解液をサンプルとして、ERK2タンパク質のウェスタンブロット法による検出を試みました。抗原抗体反応にはCan Get Signal^® Immunoreaction Enhancer Solutionを用いました。その結果、本試薬を用いた場合で、最もバックグラウンドが低く、かつシグナルが高い明瞭な結果を得ることができました。

(使用抗体)
Santa Cruz Biotechnology社の以下の抗体を使用。
1次抗体 : anti-ERK2 (C-14) rabbit polyclonal IgG [Code No.SASC154] 2,000倍希釈
2次抗体 : anti-rabbit IgG goat polyclonal IgG [Code No.SASC2301] 20,000倍希釈
 

2.リン酸化タンパク質の検出

HeLa細胞溶解液(EGF刺激+/-)をサンプルとして、
本試薬をブロッキング剤として使用したウェスタン
ブロットを用いて、リン酸化ERK(p-ERK1、p-ERK2)
の検出を行いました。抗体反応には、弊社免疫
反応促進試薬Can Get Signal^® Immunoreaction Enhancer Solutionを使用しました。その結果、
非特異バンドの出現も少なく、p-ERK1(44kDa)、
p-ERK2(42kDa)それぞれに由来する2本のバンド
が明瞭に確認されました。EGF刺激の有無に
よる差も明確に確認できました。また、リン酸化
タンパク質検出時にしばしば問題となる、ブロック
剤中のカゼイン等に起因するバックグラウンドの生成も認められませんでした。

(使用抗体)
Santa Cruz Biotechnology社の以下の抗体を使用。
1次抗体 : anti-ERK (E-4) mouse monoclonal IgG [Code No.SASC7383] 1,000倍希釈
2次抗体 : anti-mouse IgG-HRP goat polyclonal IgG [Code No.SASC2005] 20,000倍希釈

<製品使用文献>
S. Hirano et al., Toxicol. Appl. Pharmacol. : 249, 8–15 (2010)
https://doi.org/10.1016/j.taap.2010.08.019