KOD FX 実施例37
ヒト爪からの直接PCR



サンプル

ヒトの爪(米粒の1/3程度の大きさ)



遺伝子名・ターゲット長

Human  β-globin 1.3~8.5 kb

プライマー
1.3 kb β-globin
Forward primer: 5’-TTAGGCCTTAGCGGGCTTAGAC-3’
Reverse primer: 5’-CCAGGATTTTTGATGGGACACG-3’
2.8 kb β -globin
Forward primer:  5’-GCTGCTCTGTGCATCCGAGTGG-3’
Reverse primer:  5’-CCAGGATTTTTGATGGGACACG-3’
3.6 kb β -globin
Forward primer: 5’-GGTGTTCCCTTGATGTAGCACA-3’
Reverse primer: 5’-ACATGTATTTGCATGGAAAACAACTC-3’
8.5 kb β -globin
Forward primer: 5’-TGATAGGCACTGACTCTCTGTCCCTTGGGCTGTTT-3’
Reverse primer: 5’-ACATGATTAGCAAAAGGGCCTAGCTTGGACTCAGA-3’

反応液組成

PCRサイクル条件

94℃, 2 min.

(98℃ 10sec.,   68℃  1min./kb) × 35 cycles

コメント

KOD FXは、血液などから直接PCRが可能であることが分かっていましたが、今回、爪を直接サンプルとして用いても、8.5 kbまでの増幅を認めることができました。本方法を用いることによって、より簡便にジェノタイピングなどが可能になると思われます。

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