実施例

KOD FX 実施例23 新規イネOsSRS3遺伝子の5´領域の単離

【遺伝子名】イネOsSRS3(5’ 領域のGC含量は、約80%)

【サンプル】イネ花芽由来のcDNA

【ターゲット長】2.4kb

【プライマー条件】
Forward 20mer  5’-TCCCGGCCTGACCTCTCTAC-3’
Reverse 20mer  5’-CAAAGTCGCCGAGAGATGAC-3’

【サイクル】
  KOD-Plus-:推奨条件(30cycles)
  他社酵素:推奨条件(30cycles)
  KOD-FX: 94℃ 2 min.
　  　　  　(98℃ 10 sec.,68 ℃ 3 min.)×30cycles
　　    　　 4℃ ∞

【反応組成液(KOD FX使用例)】
2×PCR buffer for KOD FX   25   μL
2mM　dNTPs　　              10   μL
10pmol / μL Primer#1           1.5μL
10pmol / μL Primer#2           1.5μL
Template                                1  μL
KOD FX (1.0U /μL)                1  μL
dH2O                                    10  μL
--------------------------------------------------------
Total                                     50  μL

【データご提供】
福井県立大学生物資源学部　　
北川佳名子先生、隠岐勝幸先生、岩崎行玄先生

【先生からのコメント】
今までNested PCRしても得られなかった遺伝子が、KOD FXを用いたら一回のPCRで明瞭な増幅が得られました。また、クローニング産物のシーケンス結果も正確でした。

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