実施例

KOD FX Neo 実施例3 マウステールライセートを用いた増幅の比較

アルカリ溶解法を用いて調製したマウステールライセートをサンプルとして、3種類のマウス遺伝子の増幅を行いました。その結果、KOD FX Neoでのみ全ターゲットについて良好な増幅が認められました。このようにKOD FX Neoではサンプルを直接PCRに持ち込むことが可能であり、煩雑な精製を省略することが可能です。

96ウェルPCRプレートを用いるマウステール処理法(アルカリ溶解法)
マウステール(3 mm程度)を96穴プレートに入れる
↓←50 mM NaOH 180μLを加え、蓋をしてVortexにて良く攪拌する
↓スピンダウン(軽く振って液を下に落とす程度でも問題ありません)
↓95℃, 10 min.インキュベート(サーマルサイクラーを使用)
↓←1 M Tris-HCl (pH 8.0)  20μLを加え、蓋をしてVortexにて良く攪拌する
↓スピンダウン(軽く振って液を下に落とす程度でも問題ありません)
上清(テンプレート)　⇒　0.5〜2μLをPCR反応液50μLに添加

※マウステール切片は、液に浸るようにカットしてください。
※熱アルカリにご注意ください。
※処理後、マウステールは完全には溶解しません。マウステールの表面が溶ける程度です。
※本方法は、1.5mLマイクロチューブなどを用いても可能です。

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