実施例

KOD SYBR™ qPCR Mix 実施例1 増幅困難なターゲットの検出

●GCリッチなターゲット
GC含量が70%を超えるターゲットに対し、各リアルタイムPCR試薬による反応性の比較を行いました。鋳型には、弊社の高性能逆転写反応用試薬「ReverTra Ace^® qPCR RT Kit [Code No. FSQ-101]」により合成したHeLa細胞total RNA由来のcDNAを用い、cDNAの5倍希釈(5段階)について、反応を実施しました。その結果、弊社従来品では、増幅困難であったGCリッチなターゲットに対しても、定量的な増幅が認められました。また、反応特異性が高く、プライマーダイマーが生じにくいため、低コピーまでの幅広い定量可能域を得ることができました。


             図 GCリッチなターゲットに対するリアルタイムPCR(ABI StepOnePlus^TM 使用)

●GC含量に偏りがあるターゲット
ヒトゲノムをテンプレートとして、配列中の赤字で示した部分をPrimer配列として使用し、解析を行いました。
その結果、本品では定量的な増幅が認められ、2次構造をとりやすいターゲットにおいても有効であることが確認できました。


           図 GC含量に偏りのあるプロモーター領域に対するリアルタイムPCR(ABI StepOnePlus^TM 使用)

【反応条件】
DW                                        X  μL
KOD SYBR™ qPCR Mix        10  μL
Primer F                                4  pmole       
Primer R                               4  pmole
50xROX reference dye       0.4μL
Template DNA                     Y μL　　　
　　　　　　　　             20 μL

【PCRサイクル】
98℃, 2 min.
↓
(98℃, 10 sec. - 60℃, 10 sec. - 68℃, 30 sec.) × 40 cycles
*Date collectionは伸長ステップに設定しました。


KOD SYBR™ qPCR Mix 製品ページ
実施例一覧ページ