実施例

KOD FX 実施例18 Human転写因子(HNF3b, C/EBPβ, FTFおよび HNF6)cDNAとmiR-17,18,19,20,92領域genomic DNAの増幅

【遺伝子名、ターゲット長、及びプライマー配列】
　　●HNF3b　(ターゲット長:1.4kb)
　　   プライマー  5'ACTCGAATTCCAGTATGCTGGGAGCGGTGAAGA3’
　　　　　　　　　　　 5'AAGGGGTACCAGAGTTAGCCGGGCCTGAA3'
　　●C/EBPβ (ターゲット長:1.0kb)
       プライマー  5'ATTAGAATTCGTTCATGCAACGCCTGGTGGCC3'
　　　　　　　　　　　5'CGCGGGTACCGCGCTAGCAGTGGCCGGAGGA3'
　　●FTF        (ターゲット長:1.6kb)
       プライマー  5'CTATGAATTCACTAAGAATGTCTTCTAATTC3'
　　　　　　　　　　　 5'ATTCGATATCTTTAAAGCAAGTTTTTAA3'
　　●HNF6     (ターゲット長:1.4kb)
       プライマー  5'TCGCGAATTCCACGATGAACGCGCAGCTGACCAT3'
　　　　　　　　　　　5'CTTTGGTACCGAGGTTTTAGTTTGTGGTTCT3'　　　　　
    ● miR-17,18,19,20,92領域   (ターゲット長:1.1kb)
       プライマー  5'GGTTACTAGTTGTTAGAGTTTGAGGTGTTA3'
　　　　　　　　　　　5'TATGACTAGTCATATCGCAATACTTAACAG3

                                            (青字はhomologous sequenceを示します)
【サンプル】
  HNF3b, C/EBPβ,FTF,HNF6:
   ヒト肝癌由来細胞株HuH7由来cDNA(0.1μg Total RNA相当)
  miR-17～92:
    ヒト肝癌由来細胞株HuH7由来Genomic　DNA　0.2μg
 

【サイクル】
  KOD FX:
  94℃ 2min.
  (98℃ 10sec., 55℃ 30sec., 68℃ 2min.) ×40cycles
  他社酵素:推奨条件

【データご提供】
  金沢大学がん研究所細胞情報調節
  黒木和之　先生
 

【先生からのコメント】
  容易に各種クローンを入手でき驚きました。

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