実施例

Can Get Signal immunostain 実施例3 グリオブラストーマのCD133染色における従来法との比較検討(免疫染色)

【データご提供】
北海道大学大学院医学研究科分子細胞病理学分野
野田頭未歩先生、笹井研先生

【結果・コメント】

左から、従来法、Can Get Signal^®immunostain Solution A使用時、Solution B使用時。

従来法では微弱なシグナルが、Can Get Signal^® immunostain を使用することで増強された。
ただしSolution Aを用いた場合はバックグラウンドが高く、全体的に一様の染まりが見られたため、
観察には適さないと考えられる。今後は、Solution Bを用いて、抗体の希釈倍率を至適化することで、
よりよい染色条件を見出すことが出来ると考えられる。

【実験方法】
　(1)サンプルの由来:ヒト脳腫瘍(グリオブラストーマ)
　※抗原タンパク質の発現誘導の有無 :なし

　(2)サンプル調製法:Paraffin Embedded Section

　(3)サンプル調製方法
　ホルマリン固定後、パラフィン包埋し、ミクロトームで厚さ約 1.5-2 μmに薄切、抗原賦活なし。

　(4)ブロッキング、内因性ペルオキシダーゼ活性阻止について、
　1. ブロッキング溶液名, 希釈倍率, 溶媒:Protein Block , Serum-Free
　2. インキュベート温度 :37℃
　3. インキュベート時間 :10分間
　4. 内因性ペルオキシダーゼ活性阻止:1% H₂O₂ 過メタノールにて室温10分インキュベート

　(5)抗体について

　<1次抗体について>
　1. 抗体名:Rabbit polyclonal to CD133-Stem Cell Marker
　2. 希釈倍率 :1/35
　3. 希釈溶媒 :1% PBS / BSA or Solution A or SolutionB
　4. インキュベート温度:室温
　5. インキュベート時間:O/N

　<1次抗体の検出方法について>
　検出用キット(2次抗体を含む)を使用

　<2次抗体,検出用キットについて>
　1. メーカー名:Dako
　2. 商品名:Envision ( Dako ChemMate )
　3. インキュベート温度:室温
　4. インキュベート時間:30分間

　(6)発色方法・検出方法について　
　DAB ( Dako )

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