KOD One 実施例19
高速PCRによる 17.5~40kbの長鎖ターゲットの増幅

KOD One® PCR Master Mix および他社PCR酵素を用い、ヒトゲノムDNAをテンプレートとして長鎖ターゲットの増幅を行いました。

【プライマー配列】

  ターゲット 17.5kb Hbg
    Forward Primer TGCACCTGCTCTGTGATTATGACTATCCCACAGTC
    Reverse Primer ACATGATTAGCAAAAGGGCCTAGCTTGGACTCAGA
   
  ターゲット 24kb tPA
    Forward Primer CCTTCACTGTCTGCCTAACTCCTTCGTGTGTTCC
    Reverse Primer TGTCTCCAGCACACAGCATGTTGTCGGTGAC
   
  ターゲット 32kb Hbg
    Forward Primer AGACTTCACATGCTGCTCTGTGCATCCGAGTG
    Reverse Primer ACATGATTAGCAAAAGGGCCTAGCTTGGACTCAGA
   
  ターゲット 40kb Hbg
    Forward Primer GTTCTCCTCTGCATATCTCCCCACCGCATCTCTTT
    Reverse Primer CCTTCAGTGCCCATGATGTAGGAAAGTGTGGCATA


【反応条件】   

  (1) 反応液組成           (μL)   (μL)    (2) サイクル条件
  Lane 1-3 Lane 4-8    
    滅菌蒸留水    7.8   3.8     98℃, 10sec.  30cycles
    KOD One® PCR Master Mix   10   10     60℃,   5sec.
    10pmol/μL Primer F    0.6   0.6     68℃, 10sec./kb
    10pmol/μL Primer R    0.6   0.6         
    10ng/μL ヒトゲノムDNA    1   5   他社PCR酵素は、メーカー 推奨の条件  にて実施しています。
   
    Total Volume   20   20  


【結果】
 KOD One® PCR Master Mix を用いた場合、17.5~40kbまで増幅が確認できました。



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