実施例

KOD One 実施例17 ワンステップ法で調製した植物ライセートからの増幅

ワンステップ法にて調製したタバコ葉ライセートを用い、KOD One^® PCR Master Mix (色素なし,入り) および従来品で、rbcL遺伝子の増幅比較を行いました。
※ワンステップ法でサンプル調製を行った場合、植物組織は完全には溶解しません。

【ターゲット遺伝子名と長さ】
　rbcL　/  1.3kb

【プライマー配列】
  Forward Primer:   ATGTCACCACAAACAGAGACTAAAGC
  Reverse Primer:   AAGCAGCAGCTAGTTCCGGGCTCCA

【反応液組成】		(μL)
	滅菌蒸留水	Y
	KOD One® PCR Master Mix	10
	10pmol/μL Primer F	0.6
	10pmol/μL Primer R	0.6
	ライセート	0.25~1
	Total Volume	20

【サイクル条件】
	98℃, 10sec.		30cycles
	60℃,  5sec.
	68℃,  7sec.
	(5sec. /kb)

従来品PCR酵素は、それぞれ推奨の条件にて実施しています。

【結果】
KOD One^® PCR Master Mixでは良好な増幅が得られました。KOD FX Neoでは、同様の増幅が見られましたが、KOD -Plus- Neo は、ライセート1μlの場合は増幅が見られず、植物成分による阻害がかかったものと思われます。






 M : 1kb DNA Ladder
 1 :ライセート 0.25μL
 2 : ライセート 0.5μL
 3 : ライセート 1.0μL




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